[发明专利]多粘类芽孢杆菌GY40及其可湿性粉剂的制备与用途

说明书

本发明公开了一种多粘类芽孢杆菌(Paenibacillus polymyxa)GY40菌株，其保藏号为：CGMCC NO.14481。本发明还公开了多粘类芽孢杆菌GY40菌株的产芽孢发酵培养方法，以及利用多粘类芽孢杆菌GY40菌株制备菌粉和可湿性粉剂的方法。本发明菌株具有陆源微生物不具有的较强耐盐性，生长温度低，抑菌作用强的优点；其产芽孢发酵方法配方简单，原料主要为农产品下脚料，价格低廉，来源广泛，菌株生长速度快，发酵温度低，发酵时间短，发酵条件易于控制，发酵芽孢产量高，减少了原料成本，降低了发酵能耗，提高了发酵生产效率，该菌株制得的可湿性粉剂具有很好的防治小麦赤霉病、黄瓜枯萎病作用，可以用于小麦和黄瓜种植。

技术领域

本发明涉及一种源自海洋的菌株，特别是一种多粘类芽孢杆菌GY40菌株，本发明还涉及该多粘类芽孢杆菌GY40菌株的发酵培养方法，利用该菌株制备菌粉、可湿性粉剂的方法和用途。

背景技术

芽孢杆菌可以产生抗逆性强的内生芽孢，芽孢适合储藏和运输，因此是开发的微生物菌剂的主要活性成分。目前研制成功的生防活菌制剂中大多数以芽孢为主要成分，研究菌株产芽孢培养基和发酵条件，提高发酵水平和芽孢产率是开发芽孢杆菌活菌制剂的关键，对于提高生产效率具有重要意义。

多粘类芽孢杆菌(Paenibacillus.polymyxa)中很多菌株作为重要的生防资源，用于多种植物病害的生物防治，该菌对人畜安全、无环境污染、对植物非致病性，在生产过程中活菌量高且产品稳定性强，是目前进行微生物农药规模化生产的理想菌属。美国环境保护署(EPA)已将其列为可商业上应用的微生物种类之一，我国农业部也将其列为免做安全鉴定的一级菌种。一些学者分离得到了多个多粘类芽孢杆菌优良菌株，系统研究了起抗菌防病作用。也有学者将筛选到的多粘类芽孢杆菌研制成了0.1×10⁸CFU/g多粘类芽孢杆菌细粒剂(KDLD)，已登记并在生产上应用，对番茄青枯病具有良好的防效。

海洋微生物生长在寡营养、低温、高盐等海洋环境中，因此会具有耐盐和低营养等特性，具有更广泛的适应性，容易培养，在环境中易于定殖，使得洋微生物的开发与研究具有巨大的潜力。不同学者在我国不同的海域分离到了一些能够抑制植物病原菌的海洋微生物菌株，如谢听等在其分离得到的8株对植物病菌具有抑制作用的的芽孢杆菌菌株，其中一株为多粘类芽孢杆菌(Paenibacillus polymyxa)，在该菌株代谢产物中提取到细胞壁降解酶类活性物质；牛军等在东海海域分离得到了一株对几种植物病原真菌具有拮抗作用的海洋真菌；刘淼等在大连湾地区分离得到了一株海洋枯草芽孢杆菌，其对稻瘟病具有强烈的抑制作用，马桂珍等从连云港海域分离到一株多粘类芽孢杆菌(Paenibacillus.polymyxa)L₁-9菌株，该菌株发酵液对水稻纹枯病菌等17种植物病原菌具有抑制作用，并系统研究了该菌株产生抑菌物质的发酵条件，胡飞等人对分离自青岛海域海泥中的多粘类芽孢杆菌DN-1菌株产生芽孢固态发酵条件进行优化，得到了产芽孢固态培养基配方和发酵条件，但培养基组分含量较高，发酵温度高，时间长，产生的芽孢产量较低，固态发酵效率低。综上所述有关源自海洋的多粘类芽孢杆菌产芽孢液体发酵培养基和发酵条件的优化以及生防制剂的研制尚未见报道。针对现有的用于生防制剂开发的多粘类芽孢杆菌来自于陆源、产芽孢培养基成分复杂、发酵温度较高、发酵时间长、多粘类芽孢杆菌制剂芽孢含量低等不足，本专利采用单因素试验和正交试验对从连云港海域分离得到的一株具有强抗菌作用的多粘类芽孢杆菌(P.polymyxa)GY40菌株的产芽孢发酵培养基和摇瓶发酵条件进行优化，并在1吨发酵罐中进行放大试验，筛选与菌株生物相容性好的载体和助剂并优化其配比，制备以源自海洋的多粘类芽孢杆菌的芽孢为主要成分的可湿性粉剂，并用于黄瓜枯萎病和小麦赤霉病的防治，为海洋多粘类芽孢杆菌的开发提供原料来源广泛价格低廉的产芽孢培养基配方及其发酵工艺和可湿性粉剂配方。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是针对现有技术的不足，特别是生产上优良菌株较少、适应性差、培养温度较高等不足，提供一种源自海洋的耐盐、培养温度低、营养简单的新的多粘类芽孢杆菌(Paenibacillus polymyxa)GY40菌株CGMCC NO.14481。