[发明专利]一种用于染色体中转座子结合位点(ATAC)检测的试剂配方

说明书

本发明涉及一种用于染色体中转座子结合位点(ATAC)检测的试剂配方，其特征在于包括细胞裂解液、洗涤缓冲液、扩增反应缓冲液、电泳凝胶，能够减小裂解生物细胞的非变性程度，提升蛋白的特性和功能保留程度，转座子能够被高效率富集，产生的DNA片段更能代表样品核酸中包含的序列。

技术领域

本发明涉及生物学领域，具体涉及一种用于染色体中转座子结合位点(ATAC)检测的试剂配方。

背景技术

转座子的结合位点对于DNA的研究来说至关重要，目前对于转座子结合位点的检测试剂，大多数不能很好地标记结合位点，同时在检测结合位点的过程中浪费大量DNA片段，效率低下，工作量大，耗时费力同时加大成本，不能同时满足标记明显和检测效率高的优点。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了一种用于染色体中转座子结合位点(ATAC)检测的试剂配方，其特征在于，包括细胞裂解液、染色体释放缓冲液、Fe₃O₄磁性纳米免疫沉淀磁珠、扩增反应缓冲液、洗脱缓冲液和上样缓冲液；

(1)对应每100个细胞样本，需要细胞裂解液1份，包括：0.1wt％的羟基喹啉溶液10ml，羟基喹啉溶液在68℃水浴中充分溶解5mg苯酚；20mM的Tris-HCl溶液30ml，加入30mM的碳酸氢钠溶液直至调节PH至8.5；30mM的甲醛溶液10ml、10mM的平端连接ATP型连接酶溶液2.5ml、10mM的EDTA溶液10ml、10mM的EGTA溶液10ml、1wt％的Triton X-100溶液40ml；

(2)对应每100个细胞样本，需要染色体释放缓冲液1份，包括：10mMTris-HCl溶液10ml、150mM氯化钠溶液10ml、10mMEDTA溶液10ml、10μg蛋白酶K、0.4wt％SDS溶液10ml；

(3)对应每100个细胞样本，需要Fe₃O₄磁性纳米免疫沉淀磁珠1份，包括：5μgFe₃O₄磁性纳米免疫沉淀磁珠，Fe₃O₄磁性纳米免疫沉淀磁珠包括磁性粒子内核和包被在磁性粒子内核外表面的的羧基糖类，磁性粒子内核为粒径介于50nm-100nm范围内的Fe₃O₄球体；糖类为葡萄糖、果糖和麦芽糖其中一种或任意两种的结合；

(4)对应每100个细胞样本，需要扩增反应缓冲液1份，包括：10mM丙酮溶液30ml，用丙酮溶液溶解1mg脱氧核糖核苷三磷酸，脱氧核糖核苷三磷酸包括dATP、dGTP、dTTP、dCTP，经过转座酶激活，添加150mM氢氧化钠溶液将pH调节至8；靶DNA扩增量用下式计算：

Y代表DNA片段扩增后的拷贝数，Y为大于等于1的实数；X表示每次的扩增效率，X为实数，且0≤X≤100％，平均扩增效率的理论值为100％；n代表循环次数，n取大于等于1的正整数；i代表累加计数次数，为大于等于1且小于等于n的正整数；

(7)对应每100个细胞样本，需要洗脱缓冲液1份，包括：20mM的磷酸铝氢钠溶液30ml、20mM的磷酸钾溶液20ml、20mM的NP-40溶液20ml、5mM的氯化钠溶液40ml、20mM的氯化钾溶液25ml；

(8)对应每100个细胞样本，需要上样缓冲液1份，上样缓冲液包括：0.5wt％SDS溶液10ml；20mM的四甲基乙二胺溶液30ml、10mM的丙烯酰胺溶液10ml、10mM的亚甲基双丙烯酰胺溶液15ml、15mM的苯甲基磺酰氟溶液10ml、10mM的的磷酸酶抑制剂溶液10ml、20mM的甘油10ml、10mM的亚硫酸氢盐溶液20ml，滴加数滴浓盐酸调节pH值至7.2后，冷却至室温。