[发明专利]一种免疫检测试剂盒及其应用

说明书

本发明涉及生物技术领域的一种免疫检测试剂盒及其应用。该试剂盒包括特异性识别人免疫复合物的第一抗体；所述第一抗体能够特异性识别人免疫复合物中与抗原结合后的目标抗体，但不识别游离的人IgG以及游离的目标抗体。所述特异性识别人免疫复合物的第一抗体包括单克隆抗体和多克隆抗体，且利用含该抗体的试剂盒实现了间接法在均相免疫检测平台中的应用。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种免疫检测试剂盒、均相免疫试剂盒及其在间接均相免疫检测人血清或血浆中的目标抗体中的应用。

背景技术

间接法是测定抗体最常用的方法，其原理为利用标记的二抗检测与固相载体结合的受检抗体。将抗原连接到固相载体上，然后加入待测样本，使样本中的受检抗体与固相载体上的抗原结合形成免疫复合物，再用标记二抗与免疫复合物中的抗体结合形成固相抗原-受检抗体-标记二抗复合物，最后通过检测标记二抗来确定待测样本中受检抗体的含量。

在传统的检测方法中，以酶联免疫吸附实验(ELISA)为例，以特异性抗原包被酶标板，二抗标记辣根过氧化物酶(HRP)，在加入待测样本和酶标二抗后分别进行洗涤。固相抗原和待测样本反应后的洗涤过程，将血清中非特异的抗体冲洗干净，只有特异性抗体与固相载体上的抗原形成免疫复合物而保留下来。这样在加入酶标二抗后就不会有非特异性抗体与特异性抗体竞争结合酶标二抗，从而干扰检测。

均相免疫检测法作为新一代的免疫检测方法，与传统免疫检测方法相比具有速度快、通量高等优点，但由于平台反应特点的局限，目前并不适合用于间接法检测。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是针对现有技术的不足提供一种免疫检测试剂盒及其应用。所述试剂盒中包括特异性识别人免疫复合物的第一抗体，该抗体的特异性识别性能较高，其既不结合人免疫复合物中单独的抗原，也不结合人免疫复合物中单独的抗体，利用该含有抗体的试剂盒，实现了间接法在均相免疫检测平台中的应用。

为此，本发明第一方面提供了一种免疫试剂盒，其包括特异性识别人免疫复合物的第一抗体；所述第一抗体能够特异性识别人免疫复合物中与抗原结合后的目标抗体，但不识别游离的人IgG以及游离的目标抗体。

在本发明的一些实施方式中，所述第一抗体通过识别表位与人免疫复合物中与抗原结合后的目标抗体相结合；所述识别表位为构象表位和/或线性表位。

在本发明的一些具体实施方式中，所述识别表位位于所述人免疫复合物中与抗原结合后的目标抗体的恒定区。

在本发明的另一些具体实施方式中，所述识别表位不位于所述人免疫复合物中与抗原结合后的目标抗体的轻链部分。

在本发明的一些具体实施方式中，所述识别表位位于所述人免疫复合物中与抗原结合后的目标抗体的Fc段。

在本发明的另一些具体实施方式中，所述识别表位的氨基酸序列包含5～10个氨基酸。

在本发明的一些实施方式中，所述第一抗体为多克隆抗体。

在本发明的一些具体实施方式中，所述第一抗体的制备方法包括：用人免疫复合物对动物进行免疫，获取含有第一抗体的动物血清；然后所述动物血清经亲和层析纯化得到特异性识别人免疫复合物的第一抗体。

在本发明的进一步优选的具体实施方式中，所述第一抗体的制备方法具体包括以下步骤：

S1，用第一组人免疫复合物对动物进行免疫，免疫结束后，收集动物血清；

S2，将所述动物血清上样至结合有第二组人免疫复合物的亲和层析柱上，经洗涤、洗脱后，获得含特异性识别人免疫复合物的第一抗体的洗脱液；

S3，将所述洗脱液经透析后上样至抗人IgG亲和层析柱上，穿透液中获得特异性识别人免疫复合物的第一抗体。