[发明专利]一种从痰液中快速提取核酸的方法

权利要求书

1.一种从痰液中快速提取核酸的试剂，其特征在于，所述试剂包括前处理液和核酸抽提剂，其中前处理液包括以下成分：1-5mM 2-(N-吗啡啉)乙磺酸，1-5mM乙酸钠或1-20mg/ml蛋白酶K，5-15％β-巯基乙醇，3-7M盐酸胍，0.01-0.1％Triton X-100；

核酸抽提剂为氯仿、水饱和酚、异丙醇的一种或多种。

2.根据权利要求1所述的从痰液中快速提取核酸的试剂，其特征在于，前处理液包括以下成分：1mM2-(N-吗啡啉)乙磺酸缓冲液，pH7.5，1-2mg/ml蛋白酶K，10％β-巯基乙醇，7M盐酸胍，0.05％Triton X-100。

3.一种从痰液中快速提取核酸的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)取2-5ml的痰液样本，加入0.5-2g盐酸胍，与痰液样本等体积的氯仿，1/10-1/5体积的如权利要求1-2任意一项中所述的前处理液，前处理液体积为痰液样本体积的1/10-1/5，充分震荡后在50℃～60℃条件下保温10-20min；

(2)将上步得到的样品以转速≥12000r/min离心1-5min，观察上清液和中间层的情况，若中间层无明显固体杂质且上清液不粘稠，则直接取上清液备用；若中间层有明显固体杂质或上清液粘稠，则继续以等体积的氯仿反复抽提至中间层不明显且上清液不粘稠，取上清液备用。

4.根据权利要求3所述的从痰液中快速提取核酸的方法，其特征在于，所述方法包括：

(1)取2-5ml的痰液样本，加入0.5-2g盐酸胍、等体积氯仿，50℃～60℃震荡保温10-20min；

(2)以转速≥12000r/min离心1-5min，取上清，加入1/10-1/5体积的前处理液，50℃～60℃震荡保温8-15min，再以转速≥12000r/min离心8-15min；

(3)加入1/3体积的异丙醇，混匀，以转速≥12000r/min离心8-15min，取上清液备用。

5.根据权利要求3所述的从痰液中快速提取核酸的方法，其特征在于，所述方法包括：

(1)取2-5ml的痰液样本，加入0.5-2g盐酸胍、等体积氯仿、20-80μl的β-巯基乙醇，50℃～60℃震荡保温10-20min；

(2)以转速≥12000r/min离心1-5min，取上清，加入1/2-1.5倍体积的异丙醇，以转速≥12000r/min离心10-15min，弃上清；

(3)将上步的沉淀重悬合并在300-500μl前处理液、300-800μl水饱和酚、80-200μl氯仿中，剧烈震荡，以最高转速≥12000r/min离心1-5min，取上清液备用。