[发明专利]门多萨假单胞菌及其培养基、发酵方法和应用

权利要求书

1.一种门多萨假单胞菌的培养基，其特征在于，包括种子培养基、发酵培养基和补料培养基，其中，发酵培养基由下述组分组成：

淀粉15-30g/L，玉米浆干粉6-14g/L，磷酸氢二钾4-8g/L，硫酸铵2-5g/L，七水合硫酸镁0.1-0.4g/L；

所述补料培养基由下述组分组成：

淀粉150-300g/L、玉米浆干粉40-80g/L，磷酸氢二钾20-40g/L，硫酸铵10-25g/L，七水合硫酸镁0.5-2g/L。

2.如权利要求1所述的门多萨假单胞菌的培养基，其特征在于，所述种子培养基包括一级种子培养基，所述一级种子培养基由下述组分组成：

蛋白胨5-20g/L，葡萄糖5-20g/L，酵母粉3-7g/L，氯化钠3-7g/L。

3.如权利要求2所述的门多萨假单胞菌的培养基，其特征在于，所述种子培养基包括二级种子培养基，所述二级种子培养基由下述组分组成：

淀粉15-30g/L、玉米浆干粉6-14g/L，磷酸氢二钾4-8g/L，硫酸铵2-5g/L，七水合硫酸镁0.1-0.4g/L。

4.一种门多萨假单胞菌的发酵方法，其特征在于，包括：

(1)发酵前对发酵培养基及二级摇瓶种子液进行镜检，确保无杂菌污染；

(2)按4-8％的接种量将二级种子液接入发酵罐中；

(3)发酵开始后5-7h进行第一次补料，流加的补料培养基为发酵液体积的3-6％；发酵开始后15-17h进行第二次补料，流加的补料培养基为发酵液体积的0.1-3％；发酵结束时间为20-28h；

其中，发酵培养基由下述组分组成：

淀粉15-30g/L，玉米浆干粉6-14g/L，磷酸氢二钾4-8g/L，硫酸铵2-5g/L，七水合硫酸镁0.1-0.4g/L；

所述补料培养基由下述组分组成：

淀粉150-300g/L、玉米浆干粉40-80g/L，磷酸氢二钾20-40g/L，硫酸铵10-25g/L，七水合硫酸镁0.5-2g/L；

发酵过程的pH值设定为7.2-7.8，发酵温度设定为35-39℃。

5.如权利要求4所述的门多萨假单胞菌的发酵方法，其特征在于，发酵参数设定如下：转速500-700rpm，通气20-30L/min。

6.如权利要求4所述的门多萨假单胞菌的发酵方法，其特征在于，所述发酵培养基的制备方法如下：

(1)对发酵罐进行灭菌；

(2)加入4-6L自来水到发酵罐，倒入玉米浆干粉6-14g/L，搅拌至充分溶解；

(3)加入发酵培养基中的淀粉15-30g/L，磷酸氢二钾4-8g/L，硫酸铵2-5g/L，七水合硫酸镁0.1-0.4g/L，补加水至发酵罐总体积的60-70％；

(4)培养基组分充分溶解后，调pH至7.2-7.8后，灭菌，待温度下降到35-39℃时调pH至7.2-7.8，并校正溶氧为100％；

(5)灭菌后的培养基保温在30-40℃。

7.如权利要求4所述的门多萨假单胞菌的发酵方法，其特征在于，所述二级摇瓶种子液的制备方法如下：

(1)挑取新鲜培养的门多萨假单胞菌单菌落，接种至一级种子培养基中，于30-40℃，100-300rpm条件下培养10-14h作为一级摇瓶种子液；

(2)将一级摇瓶种子液确保无杂菌污染后，按0.1-3％的接种量将一级种子液接种于二级种子培养基中，于30-40℃，100-300rpm条件下培养14-20h作为二级种子液；

所述一级种子培养基由下述组分组成：

蛋白胨5-20g/L，葡萄糖5-20g/L，酵母粉3-7g/L，氯化钠3-7g/L；

所述二级种子培养基由下述组分组成：

淀粉15-30g/L、玉米浆干粉6-14g/L，磷酸氢二钾4-8g/L，硫酸铵2-5g/L，七水合硫酸镁0.1-0.4g/L。