[发明专利]一种利拉鲁肽的合成方法

权利要求书

1.一种利拉鲁肽的合成方法，其特征在于，其步骤如下：

(1) 固相合成利拉鲁肽序列的第1-4位氨基酸作为第一片段，

(2) 固相合成利拉鲁肽序列的第5-31位氨基酸，脱除20位Lys 的侧链保护基团并偶联Pal-γ-Glu-Otbu，作为第二片段；

(3) 第一片段与第二片段液相偶联，合成全保护利拉鲁肽，经裂解沉淀，得到利拉鲁肽。

2.根据权利要求1所述的利拉鲁肽的合成方法，其特征在于：步骤(1)中，第一片段与第二片段所用的树脂为2- CTC树脂。

3.根据权利要求1所述的利拉鲁肽的合成方法，其特征在于：步骤(2)中，第二片段中20位Lys的侧链保护基团选为催化氢化脱除的Alloc。

4.根据权利要求1所述的利拉鲁肽的合成方法，其特征在于：步骤(1)与/或 (2)中，合成第一片段与第二片段的所用的缩合剂为DIC/HOBt，HBTU/HOBT/DIEA，PyBop/HOBT/DIEA其中的一种或多种；所用的反应溶剂为DCM、DMF、NMP、DMSO中的一种或多种组合；所使用的Fmoc脱除试剂为v/v15%～25%哌啶/DMF溶液。

5.根据权利要求1所述的利拉鲁肽的合成方法，其特征在于：步骤(1)与/或 (2)中，第一片段、第二片段全保护裂解试剂为v/v15%～25%TFE/DCM或v/v0.05%～0.15%TFA/DCM。

6.根据权利要求1所述的利拉鲁肽的合成方法，其特征在于：步骤(3)中第一片段与第二片段液相偶联采用的缩合剂为DCC/HOSu组合或EDC·HCl/HOSU组合。

7.根据权利要求1所述的利拉鲁肽的合成方法，其特征在于：步骤(3)采用的裂解试剂为TFA:Thioanisole:Anisole:EDT=90:4～6:2～4:1～3。

8.根据权利要求1所述的利拉鲁肽的合成方法，其特征在于：步骤(3)采用的裂解试剂为TFA:Thioanisole:Anisole:EDT=90:5:3:2。

9.根据权利要求1所述的一种利拉鲁肽的合成方法，其特征在于，其具体步骤如下：

（1）Fmoc-Gly-2-CTC树脂的制备：

2-CTC树脂加入到固相反应器中，加入适量 DCM溶胀树脂；抽干溶剂，加入Fmoc-Gly-OH，DIEA，DMF溶液，搅拌反应；抽干溶剂，加入甲醇/DCM溶液，封闭；DCM与甲醇交替洗涤若干次；真空干燥后，得到Fmoc-Gly-2-CTC树脂；

（2）多肽片段1的制备：

取Fmoc-Gly-2-CTC树脂，加入到固相反应器中，加入DCM溶胀树脂；抽干溶剂，加入哌啶/DMF溶液，反应；抽干溶剂，加入DMF洗涤；茚检结果呈阳性；

取Fmoc-Glu(otbu)-OH，HOBt，DIC，加入DMF溶解，冰浴活化，将活化后的溶液加入到反应器中，反应，茚检检测结果呈阴性后，抽干溶剂；加入DMF洗涤；

重复以上步骤，按照氨基酸序列，依次加入Fmoc-Ala-OH、Boc-His(Trt)-OH进行偶联反应；偶联结束后，DCM与甲醇交替洗涤，真空干燥，得到肽树脂Boc-His(Trt)-Ala-Glu(Otbu)-Gly-2-CTC；

将肽树脂Boc-His(Trt)-Ala-Glu(Otbu)-Gly-2-CTC加入到TFE/DCM中，反应；收集滤液，滤液进行真空旋干；得到Boc-His(Trt)-Ala-Glu(Otbu)-Gly-OH即为多肽片段1；

（3）多肽片段1-琥珀酰亚胺酯的制备：

Boc-His(Trt)-Ala-Glu(Otbu)-Gly-OH加入到DCM溶解，加入DCC，HOSU，冰浴条件下反应，TLC监测原料多肽片段1反应完全消失；反应液用纯水、饱和氯化钠溶液洗涤，过滤除去不溶物，滤液加入无水硫酸钠干燥；所得滤液即为多肽片段1-琥珀酰亚胺酯；

（4）多肽片段2的制备：

取Fmoc-Gly-2-CTC树脂，加入到固相反应器中，加入DCM溶胀树脂，抽干溶剂，加入哌啶/DMF溶液，反应；抽干溶剂，加入DMF洗涤；茚检结果呈阳性；

称取Fmoc-Arg(Pbf)-OH ，HOBt，DIC，加入DMF溶解，冰浴活化；将活化后的溶液加入到反应器中，反应，茚检检测结果呈阴性后，抽干溶剂；加入DMF洗涤；

重复以上步骤，按照氨基酸序列，依次加入Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-Val-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Trp(Boc)-OH、Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Ile-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Glu(otBu)-OH、Fmoc-Lys(Alloc)-OH、Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Gln(Trt)-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Glu(otBu)-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Tyr(tBu)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Val-OH、Fmoc-Asp(otBu)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Thr(tBu)-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Thr(tBu)-OH进行偶联反应；

取四三苯基膦钯，吗啡啉，THF加入到固相反应器中，反应，DMF洗涤，茚检结果呈阳性；

取PPal-γ-Glu-Otbu，HOBt，DIC加入DMF溶解，冰浴活化5min；将活化后的溶液加入到反应器中，反应，茚检检测结果呈阴性后，抽干溶剂；加入DMF洗涤；抽干溶剂，加入哌啶/DMF溶液，反应，抽干溶剂，加入DMF洗涤；茚检结果呈阳性，DCM与甲醇交替洗涤，真空干燥，所得树脂即为肽树脂2；

将肽树脂2加入到TFE/DCM中，反应，收集滤液，滤液进行真空旋干；旋干后固体即为多肽片段2；

（5）全保护肽的制备：

将多肽片段1-琥珀酰亚胺酯的DCM溶液加入到多肽片段2的DCM溶液中，冰浴条件下反应，反应结束后将反应液旋干，所得产品即为利拉鲁肽的全保护肽；

（6）裂解：

配制裂解试剂为TFA:Thioanisole:Anisole:EDT=90:5:3:2，冰浴条件下加入到全保护肽中，恢复至室温继续反应，反应结束后，加入无水乙醚沉淀，离心沉淀；干燥后所得产品即为利拉鲁肽粗肽。