[发明专利]一种检测乳牛短脊椎综合症的引物、试剂盒及检测方法

权利要求书

1.一种用于检测乳牛短脊椎综合症的引物，其特征在于，所述引物由核苷酸序列如SEQID NO:1所示的正向引物和核苷酸序列如SED ID NO:2所示的反向引物组成；所述正向引物标记有生物素；所述反向引物标记有地高辛。

2.一种用于检测乳牛短脊椎综合症的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1所述的引物。

3.根据权利要求2所述的用于检测乳牛短脊椎综合症的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括重组酶、聚合酶、DNA结合蛋白、缓冲溶液、阳性内质控、ddH₂O和侧流层析检测试剂。

4.根据权利要求3所述的用于检测乳牛短脊椎综合症的试剂盒，其特征在于，所述阳性内质控含有由如SEQ ID NO:3和SED ID NO:4所示的核苷酸序列组成的引物对。

5.根据权利要求3所述的用于检测乳牛短脊椎综合症的试剂盒，其特征在于，所述重组酶为T4uvsX/uvsY；所述聚合酶为Bsu DNA聚合酶；所述DNA结合蛋白为T4gp32；所述缓冲溶液含有下述组分:Tris-HCl缓冲液、乙酸钾、乙酸镁、二硫苏糖醇、dNTPs、ATP、磷酸肌酸、肌酸激酶和Carbowax20M。。

6.根据权利要求3所述的用于检测乳牛短脊椎综合症的试剂盒，其特征在于，所述缓冲液含有下述浓度的组分:Tris-HCl缓冲液50mM、乙酸钾100mM、乙酸镁14mM、二硫苏糖醇2mM、dNTPs 200μM、ATP 3mM、磷酸肌酸50mM、肌酸激酶100ng/μL、Carbowax20M 5wt％；所述Tris-HCl缓冲液的pH值为7.9。

7.根据权利要求3所述的用于检测乳牛短脊椎综合症的试剂盒，其特征在于，所述侧流层析检测试剂包括侧流层析试纸条和杂交检测缓冲液。

8.根据权利要求3所述的用于检测乳牛短脊椎综合症的试剂盒，其特征在于，所述杂交检测缓冲液由下述浓度的组分构成：BSA 5wt％和PBS缓冲液10mM。

9.根据权利要求3所述的用于检测乳牛短脊椎综合症的试剂盒，其特征在于，所述的阳性内质控为插入了人GAPDH基因的重组质粒。

10.一种利用权利要求2～8任一项所述的试剂盒的检测乳牛短脊椎综合症的方法，其特征在于，包括以下步骤:

(1)提取待测样本的DNA作为检测模板；

(2)对所述检测模板进行扩增，得到扩增DNA序列；

(3)采用侧流层析试纸条对扩增产物进行检测；

(4)根据试纸条反应区呈现点判断检测结果。