[发明专利]一种含盐霉素发酵液的预处理方法和盐霉素化学效价的测定方法

说明书

本发明提供了一种含盐霉素发酵液的预处理方法，属于化学效价测定技术领域，包括以下步骤：1)将含有盐霉素的发酵液用无水乙醇稀释，得到第一稀释液；2)将所述步骤1)得到的第一稀释液进行超声萃取，得到萃取液，将所述萃取液过滤，得到的液相部分为预处理液，所述超声萃取的功率为450～550W，所述超声萃取的时间为10～30min。与振荡萃取相比，本发明提供的预处理方法不仅节省了每个样品的萃取时间，而且萃取更完全。

技术领域

本发明属于化学效价测定技术领域，尤其涉及一种含盐霉素发酵液的预处理方法和盐霉素化学效价的测定方法。

背景技术

盐霉素属于聚醚类一元羧酸，具有特殊的环状结构，它对细胞中K⁺、Na⁺等阳离子的亲和力特别强，是典型的离子载体抗生素，由白色链霉菌(Streptomyces albus)发酵产生，对大多数革兰氏阳性菌和各种球虫有较强的抑制杀灭作用，且不易产生耐药性和交叉抗药性，排泄迅速，残留量极低。盐霉素添加到反刍动物饲料中，可增加报酬率。作为抗菌剂特殊的目标，反刍动物细菌种群以及肠道内微生物环境的更替，增加了动物对碳氮的保持力，提高了产品效率，因此在养禽业中广泛应用。

一般盐霉素发酵液中，除了盐霉素以外，还含有大量的发酵菌丝体，未完全利用的培养基原料，色素，各种蛋白胶状物以及其他的代谢产物等。盐霉素仅小部分存在于液体中，其余大部分保留在发酵菌细胞内，且盐霉素不溶于水，溶于有机溶剂，所以测定盐霉素效价时必须对发酵液进行预处理，主要是利用有机溶剂萃取出胞内大量的盐霉素，且使发酵液中胞内和胞外盐霉素都溶于有机溶剂，通过滤液进行效价检测。若预处理不彻底，胞内的盐霉素未完全释放出来，则会导致效价检测结果偏低。

目前，常用的预处理方法是利用乙醇或甲醇等有机溶剂进行稀释，采用振荡萃取的方法释放菌丝体内的盐霉素。由于盐霉素发酵液成分复杂，菌丝体量大，想完全释放胞内盐霉素并不容易，需要1小时长时间的振荡萃取，需要较长的萃取时间。

发明内容

本发明的目的在于提供一种含盐霉素发酵液的预处理方法，缩短了萃取盐霉素的时间，而且萃取的更完全。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种含盐霉素发酵液的预处理方法，包括以下步骤：

1)将含有盐霉素的发酵液用无水乙醇稀释，得到第一稀释液；

2)将所述步骤1)得到的第一稀释液进行超声萃取，得到萃取液，将所述萃取液过滤，得到的液相部分为预处理液，所述超声萃取的功率为450～550W，所述超声萃取的时间为10～30min。

优选的，所述步骤1)中含有盐霉素的发酵液与无水乙醇的体积比为(2～7):(40～50)。

优选的，所述步骤2)超声萃取的频率为35～45KHz。

本发明还提供了一种盐霉素化学效价的测定方法，包括以下步骤：

a.将上述技术方案得到的预处理液用无水乙醇进行稀释，得到第二稀释液，根据稀释后预处理液的效价为20～140u/mL来确定预处理液稀释倍数和稀释用无水乙醇的体积，所述预处理液稀释倍数＝预估效价/1000，所述稀释用无水乙醇的体积＝预估效价/1000-1；

b.将所述步骤a得到的第二稀释液与香兰素溶液、无水乙醇混合，得到含有香兰素和盐霉素的混合液；

c.将所述步骤b得到的含有香兰素和盐霉素的混合液在50～70℃的条件下水浴25～35min，得到检测液；