[发明专利]一种用于HLA-A基因PCR扩增、基因分型的方法、引物组及试剂盒

权利要求书

1.一种用于HLA-A基因PCR扩增的方法，其特征在于，在同一反应体系和同一PCR扩增条件下对HLA-A基因的8个外显子区进行PCR扩增；采用第一组引物PCR扩增HLA-A基因第1个外显子至第3个外显子，采用第二组引物PCR扩增HLA-A基因第4个外显子至第8个外显子；所述第一组引物序列如SEQID NO.1和SEQID NO.2所示，所述第二组引物序列如SEQID NO.3～SEQID NO.5所示。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述反应体系的组成如下：

10×PCR扩增缓冲液，2μl

MgCl₂，50mM，1μl

dNTP，25mM，0.5μl

第一组引物A-F1，其序列如SEQ ID NO.1所示，5μM，1.0μl

第一组引物A-R1，其序列如SEQ ID NO.2所示，5μM，1.0μl

第二组引物A-F2-1，其序列如SEQ ID NO.3所示，5μM，0.8μl

第二组引物A-F2-2，其序列如SEQ ID NO.4所示，5μM，0.8μl

第二组引物A-R2，其序列如SEQ ID NO.5所示，5μM，1.0μl

DNA模板，20-50ng/μl，2μl

Taq酶，0.15μl

加ddH₂O至:20μl；

所述PCR扩增条件如下：

96℃2min；

96℃30Sec,65℃30Sec,72℃2min，共5个循环；

96℃30Sec,62℃30Sec,72℃2min，共35个循环；

10℃∞。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述第一组引物PCR扩增HLA-A基因片段长度为1.1kb，所述第二组引物PCR扩增HLA-A基因片段长度为1.4kb。

4.一种用于同一反应体系和同一PCR扩增条件下对HLA-A基因的8个外显子区进行PCR扩增的引物组，其特征在于，用于PCR扩增HLA-A基因第1个外显子至第3个外显子的第一组引物和用于PCR扩增HLA-A基因第4个外显子至第8个外显子的第二组引物；所述第一组引物如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示，所述第二组引物序列如SEQ ID NO.3～SEQ ID NO.5所示。

5.一种HLA-A基因高分辨率测序分型的方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1：从人离体的组织或血液中获取待测样品DNA；

S2：以第一组引物和第二组引物作为PCR扩增引物，以S1中获得的DNA为模板，在一个PCR反应体系中同时PCR扩增出HLA-A基因的第1外显子至第3外显子，和第4外显子至第8外显子；

S3：将S2步骤中扩增出的PCR产物进行纯化后分别进行测序扩增；

S4：将步骤S3中的测序扩增结果与标准HLA-A基因序列进行比对，确定待测样本的HLA基因的型别；

所述第一组引物如SEQIDNO.1和SEQIDNO.2所示，所述第二组引物序列如SEQIDNO.3～SEQIDNO.5所示。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述步骤S2中PCR扩增反应条件为：96℃预变性2min，随后96℃，30Sec；65℃，30Sec；72℃，2min，共5个循环，之后96℃，30Sec；62℃，30Sec；72℃，2min，共35个循环，最后将反应液放置于10℃保存。

7.根据权利要求6所述方法，其特征在于，所述S3步骤中测序扩增用的测序引物序列如SEQIDNO.6～SEQIDNO.11所示。