[发明专利]富含花青素的蚯蚓蛋白粉的制备方法

权利要求书

1.一种富含花青素的蚯蚓蛋白粉的制备方法，其特征在于：包括蚯蚓蛋白的提取步骤和富含花青素的蚯蚓蛋白粉的制备步骤；

蚯蚓蛋白的提取步骤具体包括蚯蚓前处理步骤、蚯蚓液分离提取步骤、蚯蚓蛋白的酶解步骤和蚯蚓蛋白的超滤步骤；

蚯蚓前处理步骤具体包括：

（1）筛分：将活体蚯蚓筛分以除去蚯蚓中的蚓粪、泥土和其他杂质；

（2）清洗：将筛分后的活体蚯蚓放入清洗池中，加水浸泡清洗，以除去蚯蚓体上的泥沙杂质；

（3）匀浆：将清洗干净的蚯蚓放入胶体磨中均匀破碎磨成糊状，制得蚯蚓浆液；

（4）沉淀泥沙及过滤：将蚯蚓浆液置于过滤槽中加入纯水进行过滤，蚯蚓浆液与纯水的加入比例为1:1~1:2，过滤槽分为第一过滤槽和第二过滤槽，在第一过滤槽和第二过滤槽的入口处设置有进气阀，将过滤后的洁净空气通过进气阀打入过滤槽中，在第一过滤槽和第二过滤槽内分别设置有过滤管，在过滤管上均匀开设有滤孔，蚯蚓浆液通过泵的吸力从过滤管上的滤孔抽出，从而实现蚯蚓浆液和大颗粒杂质的分离；具体过滤步骤为：先将蚯蚓浆液通入至第一过滤槽内，打开设置在第一过滤槽入口处的进气阀向第一过滤槽内通气，以提高蚯蚓浆液的分散性，便于后面的盐析沉淀蛋白质，然后关闭进气阀，打开泵，通过泵的吸力将第一过滤槽内的蚯蚓浆液从池内吸入管道进行过滤，第一过滤槽内过滤管的孔径为5mm，同时在过滤管上设置有纱网，纱网的孔径为90目，以增大过滤效果，使蚯蚓浆液中的杂质除的更彻底，以提高蚯蚓蛋白的纯度，然后通入至第二过滤槽内进一步过滤除杂，第二过滤槽内管道的孔径为2mm，同时设置在第二过滤槽管道上的纱网孔径为120目，经第二过滤槽过滤后的蚯蚓浆液经泵抽出等待下一工序；第一过滤槽和第二过滤槽中的过滤管采用多管道设置以增大过滤面积和提高过滤效率；

（5）冷冻储存：将过滤后的蚯蚓浆液放入储存桶中，在-15℃~-20℃条件下储存，备用；

（6）解冻：将冷冻储存的蚯蚓取出在4℃条件下解冻；

蚯蚓液分离提取步骤具体包括：

（1）制备第一次盐析液：配制饱和度为30%的硫酸铵盐析液，具体为：在100份4度预冷的纯水中缓慢加入17.6份的固体硫酸铵，并在加入过程中不断的搅拌，使固体硫酸铵充分溶解得到硫酸铵盐析液；

（2）第一次盐析：取制备好的饱和度为30%的硫酸铵盐析液缓慢加入至蚯蚓浆液中，并在加入过程中不断的对蚯蚓浆液进行搅拌，待硫酸铵盐析液加入完后，将加入硫酸铵盐析液的蚯蚓浆液静置过夜，以使蚯蚓浆液中的蛋白质完全沉淀，蚯蚓浆液与硫酸铵盐析液的加入比例为1:5；

（3）第一次离心：将过夜盐析后的蚯蚓浆液在14000r/min的转速下离心15min，并分别收集第一次离心沉淀和第一次离心上清液，将第一次离心沉淀在-20℃条件下储存，对第一次离心上清液进行第二次盐析；

（4）制备盐析液：配制饱和度为20%的硫酸铵盐析液，具体为：在100份4度预冷的纯水中缓慢加入13.4份的固体硫酸铵，并在加入过程中不断的搅拌，使固体硫酸铵充分溶解得到硫酸铵盐析液；

（5）第二次盐析：将上述第一次离心上清液在4℃条件下预冷，预冷后，取制备好的饱和度为20%的硫酸铵盐析液缓慢加入至第一次离心上清液中，硫酸铵盐析液与第一次离心上清液的添加比例为5:1，且在硫酸铵盐析液加入过程中不断的对第一次离心上清液进行搅拌，等硫酸铵盐析液全部加入至第一次离心上清液后，对第一次离心上清液持续搅拌1h，静置过夜；

（6）第二次离心：将上述第二次盐析液在14000r/min的转速下离心15min，并收集第二次离心沉淀和第二次离心上清液，第二次离心上清液用于发酵肥料，第二次离心沉淀与第一次离心沉淀集合，得到粗品蛋白；

再将粗品蛋白经酶解步骤、超滤步骤后得到蚯蚓蛋白粉；

富含花青素的蚯蚓蛋白粉的制备步骤具体包括：将紫薯洗净后在50℃～60℃干燥30min，然后用粉碎机粉碎后过80目筛，得紫薯粉，将紫薯粉加入至蚯蚓蛋白粉，蚯蚓蛋白粉与紫薯粉的加入质量比例为5:1，用混料装置将蚯蚓蛋白粉与紫薯粉混合均匀，得到富含花青素的蚯蚓蛋白粉。