[发明专利]可溶性尿激酶型纤溶酶原激活物受体检测试剂盒及检测方法

权利要求书

1.一种可溶性尿激酶型纤溶酶原激活物受体检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：

磁分离试剂、抗体试剂、校准品、质控品、浓缩清洗液和底物液。

2.根据权利要求1所述的可溶性尿激酶型纤溶酶原激活物受体检测试剂盒，其特征在于：

所述抗体试剂包括碱性磷酸酶标记抗体和生物素标记抗体；

所述磁分离试剂包括包被有链霉亲和素的磁微粒。

3.根据权利要求2所述的可溶性尿激酶型纤溶酶原激活物受体检测试剂盒，其特征在于，所述磁分离试剂的制备方法包括：

配制磁微粒缓冲液，所述磁微粒缓冲液的组分包括：TRIS 4.58g/L，NaCl 6.81g/L，TRITON X-100 0.5mL/L，Proclin-300 0.5-1mL/L，BSA 3-5g/L，余量为水，pH值为7.95-8.05；所述磁微粒缓冲液优选采用0.22um微孔滤器过滤，并于2-8℃冷库贮存备用；

制备磁分离试剂：

将辛二酸二琥珀酰亚胺酯溶于DMSO中，得到辛二酸二琥珀酰亚胺酯溶液；将链霉亲和素溶于pH 9.0-9.5的0.1mol/L的磷酸盐缓冲液中，得到链霉亲和素溶液；

将所述辛二酸二琥珀酰亚胺酯溶液和所述链霉亲和素溶液混合，室温静置90min，得到混合溶液；

将所述混合溶液加入到Centricon-10浓缩管中，放入到高速冷冻离心机中在3000g下浓缩，得到浓缩液；

将磁珠采用磁铁吸附2min后吸取上清，然后加入pH值为9.5的0.1mol/L的PB缓冲液，混匀30s，去上清，重复加入PBS缓冲液、混匀和去上清操作3次，得到处理后磁珠；

在所述浓缩液中加入所述处理后磁珠，混匀后室温反应4h；然后加入1mol/L TRIS溶液，37℃静置15min，得到已经标记的磁珠；

采用pH值为7.2的0.1mol/L的PB缓冲液清洗所述已经标记的磁珠，混匀30s，去上清，重复操作3次，得到清洗后磁珠；

配制磁珠保存液，组分按重量百分比计，包括：0.1％BSA，0.05％吐温-20，0.02％NaN₃，20％乙醇，余量为水，4℃保存备用；将所述清洗后磁珠放入所述磁珠保存液中，得到0.05％的链霉亲和素磁分离试剂；

将所述0.05％的链霉亲和素磁分离试剂和所述磁微粒缓冲液以1:1的体积比混匀，即得所述磁分离试剂。

4.根据权利要求2所述的可溶性尿激酶型纤溶酶原激活物受体检测试剂盒，其特征在于：

所述抗体试剂的制备方法依次包括配制抗体稀释液、配制生物素偶联抗体、配制酶标记抗体和制备抗体试剂。

5.根据权利要求4所述的可溶性尿激酶型纤溶酶原激活物受体检测试剂盒，其特征在于，所述抗体试剂的制备方法包括步骤：

配制抗体稀释液，所述抗体稀释液的组分包括：TRIS 4.58g/L，NaCl 6.81g/L，蔗糖3g/L，TRITON X-100 0.5mL/L，Proclin-300 0.5-1mL，BSA 3-5g，酪蛋白0.2-0.3g，余量为水，pH值为7.95-8.05；所述抗体稀释液优选采用0.22um微孔滤器过滤，并于2-8℃冷库贮存备用；

配制生物素偶联抗体：使用所述抗体稀释液将生物素标记的抗体进行稀释，稀释浓度为1:(800-1200)；

配制碱性磷酸酶标记抗体：按照1:(2000-4000)的稀释体积比例，使用所述抗体稀释液对碱性磷酸酶标记抗体进行稀释；

制备抗体试剂：将所述生物素标记抗体和所述碱性磷酸酶标记抗体等量混匀，置于2-8℃冷库贮存备用。