[发明专利]一种丝状微生物的染色方法及其用途有效
| 申请号： | 201711485714.6 | 申请日： | 2017-12-29 |
| 公开（公告）号： | CN108254238B | 公开（公告）日： | 2021-06-22 |
| 发明（设计）人： | 明磊强;张大海;杨宗霖;史雅琦 | 申请（专利权）人： | 乔治洛德方法研究和开发液化空气有限公司 |
| 主分类号： | G01N1/30 | 分类号： | G01N1/30;G01N21/64;G06K9/00 |
| 代理公司： | 北京市中咨律师事务所 11247 | 代理人： | 凌立;林柏楠 |
| 地址： | 法国*** | 国省代码： | 暂无信息 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 丝状 微生物 染色 方法 及其 用途 | ||
1.一种丝状微生物样品的染色方法，其特征在于包括以下步骤：
(1)配制染色液，其中所述染色液包含染色液A：Syto9和染色液B：PI染色液；
(2)对于丝状微生物的样品进行预处理，以获得合适浓度的丝状微生物样品；
(3)用步骤(1)中配制的染色液对丝状微生物样品进行染色，
其中所述方法包括：
(a)当所述样品中丝状微生物的死亡率大于30％时，步骤(1)中染色液A和染色液B配制成摩尔比为1:9，或4:45，或167:1800；或
(b)当所述样品中丝状微生物的死亡率小于10％时，步骤(1)中染色液A和染色液B配制成摩尔比为2:7，或3:14，或1503:7000。
2.如权利要求1所述的染色方法，其中步骤(3)中的丝状微生物样品在4℃下，从获取到染色的总时间差小于4个小时。
3.如权利要求1所述的染色方法，其特征在于所述丝状微生物是丝状细菌或丝状真菌。
4.如权利要求1所述的染色方法，其中所述样品是污水处理样品。
5.如权利要求4所述的染色方法，其中所述样品是样品中丝状微生物的死亡率大于30％的污水处理出口样品。
6.如权利要求1所述的染色方法，其特征在于使用固定体积的染色液A和染色液B。
7.如权利要求6所述的染色方法，其中染色液A和染色液B的总体积和丝状微生物样品的体积比为5:1至1:1。
8.如权利要求7所述的染色方法，其中染色液A和染色液B的总体积和丝状微生物样品的体积比为2:1。
9.如权利要求1所述的染色方法，其特征在于步骤(3)中的染色步骤避光进行。
10.如权利要求9所述的染色方法，其中步骤(3)中的染色步骤避光进行10至20分钟。
11.如权利要求10所述的染色方法，其中步骤(3)中的染色步骤避光进行15分钟。
12.如权利要求1所述的染色方法，其特征在于所述步骤(2)中在丝状微生物样品取得以后进行充分摇匀，以得到需要浓度的丝状微生物样品。
13.如权利要求1所述的染色方法，其中所述步骤(2)中，通过放大检测方法确定丝状微生物样品的浓度是否为需要的浓度。
14.如权利要求13所述的染色方法，其中通过显微镜观察，确定丝状微生物样品的浓度是否合适。
15.如权利要求14所述的染色方法，其中通过光学显微镜观察，以得到视野内没有重叠影像的丝状微生物样品。
16.如权利要求13所述的染色方法，其中采用磷酸盐PBS缓冲液稀释，以得到视野内没有重叠影像的丝状微生物样品。
17.如权利要求16所述的染色方法，其中所述磷酸盐PBS缓冲液是NaCl 137mmol/L，KCl2.7mmol/L，Na2HPO4 4.3mmol/L，KH2PO4 1.4mmol/L，pH7.2～7.4。
18.如权利要求1所述的染色方法，其特征在于步骤(2)中获得的合适浓度的丝状微生物样品先通过浸于水中的聚四氟乙烯膜开口处形成的双分子层膜过滤，然后进行步骤(3)的染色处理。
19.如权利要求18所述的染色方法，其中所述的双分子层膜为waterman公司的黑膜。
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