[发明专利]HLA相关的SNP标记及其检测引物对与确定方法

说明书

本发明提供一种HLA相关的SNP标记及其检测引物对与确定方法；旨在为移植风险评估提供一种引物与方法，其技术方案包括HLA相关的SNP标记，SNP标记为人6号染色体32610275位置的碱基C或T；一种用于检测权利要求1所述的SNP标记引物对具有SEQ ID NO:1‑2或SEQ ID NO:3‑4所示的核苷酸序列；上述的SNP位点的确定方法，包括步骤：1)提取宿主细胞的基因组DNA；2)将模板DNA进行PCR扩增，并将PCR产物SAP/Exon I纯化；3)纯化后的PCR产物用测序引物分别进行正向和/或反向测序扩增，测序产物纯化，ABI 3730xl毛细管电泳测序，从而确定SNP位点及其基因型。

技术领域

本发明涉及医学技术领域，具体涉及一种与HLADQ启动子相关的SNP标记分析，并通过这一SNP标记预测患者器官移植后排斥风险评估。

背景技术

在器官移植领域中，由HLA抗体介导的体液免疫引起的各类排斥反应是影响移植后人/移植物存活的最关键因素。

SNP(Single nucleotide polymorphism，单核苷酸多态性)主要是指基因组水平上由单个核苷酸变异引起的DNA序列多态性。

在人群中，HLA(Human leukocyte antigen，人类白细胞抗原)具有丰富的多态性，在器官移植中，供体器官内皮细胞中的HLA抗原常常作为识别抗原，引起一系列的排斥反应，影响这器官移植的人/器官存活率。另外HLA本质是MHC(Major histocompatibilitycomplex，主要组织相容性复合体)，在受体中具有提呈外来抗原的作用。在器官移植领域，对于供体来说，DQ表达量越低，其在细胞表面的DQ蛋白含量就越低，越难被受体的MHC提呈。而对于患者来说，DQ表达量越低，其抗原提呈能力越低，免疫状态也越低下。基于此原理，供受体DQ表达量越低越有利于器官移植的进行。研究报道，机体正常情况下，DQ的本底表达量较低，此时机体只利用HLA I类位点和DR位点提呈外来抗原。当机体的免疫状态被激活时，DQ表达量会迅速上升，产生大量的DQ蛋白，以较高的亲和力提呈外来抗原物质，激活机体的T/B淋巴细胞，杀伤外来入侵物质。而DQ蛋白的高亲和力，一方面使其更容易的提呈外来入侵抗原，但另一方面，过高的亲和力使其很容易提呈到自身蛋白，从而产生抗体攻击自身细胞，产生自身免疫病。据此前的文章报道，DQ启动子中某些转录激活区单核苷酸的改变，将使相关转录因子的结合能力受影响，从而影响DQ蛋白在各时期的调控。而位于人类第6号染色体中DR和DQ基因之间的32610275碱基是影响DQ表达量最为重要的SNP，32610275位置的碱基T时，DQ表达量较高，而当32610275位置的碱基C时，则DQ表达量较低。基于以上原理，我们通过测量患者的DQ的启动子以上位点的SNP，即可得知患者抗原提呈的能力，从而预测患者器官移植后发生体液排斥的风险。

在目前的器官移植临床中，因为供体的缺乏，供受体间HLA抗原很难完全匹配。通过DQ启动子SNP的检测，我们可以将DQ表达量低的患者配型要求降低，使患者更为容易的找到供体，减少手术等待时间；对于DQ表达量高的患者，可以提高配型的要求，减少患者术后发生排斥的风险，从而造福移植患者。

然而，目前还没有将DQ启动子SNP分析应用于器官移植的临床报道，若能通过分析DQ启动子SNP，明确患者在免疫状态下DQ蛋白的表达量，就能通过患者的抗原提呈能力预测术后产生体液排斥的风险，推动我国器官移植排斥反应的早期预测的现状，并指导临床中供体的选择，免疫抑制剂用量等。因此，通过对HLA的II类DQ位点超级启动子区SNP分子标记的研究，可以为移植排斥风险提供一种新的辅助评估手段，具有较强的临床指导意义。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种HLADQ启动子SNP位点的确定及分型方法及其应用，为移植风险评估提供一种补充手段。