[发明专利]一种嵌合抗原受体基因修饰的T淋巴细胞的制备方法、制得的CAR-T细胞及其用途在审
| 申请号： | 201711487885.2 | 申请日： | 2017-12-29 |
| 公开（公告）号： | CN108085342A | 公开（公告）日： | 2018-05-29 |
| 发明（设计）人： | 姜舒;张芸;纪惜銮;郑思建;杨顺;罗朝霞 | 申请（专利权）人： | 深圳市茵冠生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/867 | 分类号： | C12N15/867;C12N5/10;A61K35/17;A61P35/00 |
| 代理公司： | 深圳市博锐专利事务所 44275 | 代理人： | 张明 |
| 地址： | 518000 广东省深圳市南山区西丽*** | 国省代码： | 广东;44 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 嵌合抗原 受体基因 修饰 制备 重组慢病毒 感染 细胞 携带 应用 | ||
1.一种嵌合抗原受体基因修饰的T淋巴细胞的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：
S1、将分离得到的CD4+T细胞与CD8+T细胞激活；
S2、用携带EGFR-CAR的重组慢病毒感染上述步骤S1处理后的CD4+T细胞和CD8+T细胞，将感染处理后得到的EGFR-CAR CD4+T细胞和EGFR-CARCD8+T细胞共同培养，以促进EGFR-CAR CD8+T细胞增殖。
2.根据权利要求1所述的制备CAR-T细胞的方法，其特征在于：所述步骤S1中的激活步骤的具体操作为：向分离得到的CD4+T细胞和CD8+T细胞添加CD3/CD28抗体偶联磁珠。
3.根据权利要求2所述的制备CAR-T细胞的方法，其特征在于：所述CD3/CD28抗体偶联磁珠与T细胞的比例为1:1～3:1。
4.根据权利要求1所述的制备CAR-T细胞的方法，其特征在于：所述步骤S2还包括向EGFR-CAR CD4+T细胞和EGFR-CAR CD8+T细胞共培养体系添加重组人IL-2、IL-7和IL-15进行培养。
5.根据权利要求1所述的制备CAR-T细胞的方法，其特征在于：所述重组人IL-2的最终浓度为300～500IU/ml，重组人IL-7的最终浓度为5～8ng/ml，重组人IL-15的最终浓度为5～8ng/ml。
6.根据权利要求1所述的制备CAR-T细胞的方法，其特征在于：所述步骤S2中，感染时添加Polybrene，所述Polybrene的添加浓度为5～10μg/mL。
7.根据权利要求1所述的制备CAR-T细胞的方法，其特征在于：所述步骤S2中共同培养时EGFR-CAR CD4+T细胞和EGFR-CAR CD8+T细胞的比例为1:1～2:1。
8.根据权利要求1所述的制备CAR-T细胞的方法，其特征在于：所述步骤S2中的感染处理后的EGFR-CAR CD4+T细胞和EGFR-CAR CD8+T细胞共同培养时间为10～20天。
9.根据权利要求1～8任一项所述的方法制得的CAR-T细胞。
10.根据权利要求9所述的CAR-T细胞在制备治疗或预防癌症的药物中的用途。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于深圳市茵冠生物科技有限公司，未经深圳市茵冠生物科技有限公司许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/pat/books/201711487885.2/1.html，转载请声明来源钻瓜专利网。
