[发明专利]稻瘟病菌无毒基因AVR‑Pik的共显性分子标记系统及其引物和应用

权利要求书

1.一套用于鉴定稻瘟病菌无毒基因AVR-Pik等位基因类型的共显性分子标记系统，其特征在于，由分子标记CM-136、分子标记CM-200和分子标记CM-234组成；所述分子标记CM-136由DNA片段1、DNA片段2和DNA片段3组成，所述分子标记CM-200由DNA片段1、DNA片段4和DNA片段5组成，所述分子标记CM-234由DNA片段1、DNA片段6和DNA片段7组成；其中DNA片段1～DNA片段7的核苷酸序列依次如SEQ ID NO.1～SEQ ID NO.7所示。

2.应用于权利要求1所述共显性分子标记系统的分子标记引物，其特征在于，包括AP-1、AP-2、AP-AB、AP-D、AP-ABDE、AP-C、AP-ACDE和AP-B，其中使用引物AP-1、AP-2、AP-AB和AP-D扩增分子标记CM-136，使用引物AP-1、AP-2、AP-ABDE和AP-C扩增分子标记CM-200，使用引物AP-1、AP-2、AP-ACDE和AP-B扩增分子标记CM-234；所述分子标记引物AP-1的核苷酸序列依次如SEQ ID NO.8所示，所述分子标记引物AP-2的核苷酸序列依次如SEQ ID NO.9所示，所述分子标记引物AP-AB的核苷酸序列依次如SEQ ID NO.10所示，所述分子标记引物AP-D的核苷酸序列依次如SEQ ID NO.11所示，所述分子标记引物AP-ABDE的核苷酸序列依次如SEQ ID NO.12所示，所述分子标记引物AP-C的核苷酸序列依次如SEQ ID NO.13所示，所述分子标记引物AP-ACDE的核苷酸序列依次如SEQ IDNO.14所示，所述分子标记引物AP-B的核苷酸序列依次如SEQ ID NO.15所示。

3.权利要求1所述共显性分子标记系统和权利要求2所述分子标记引物在鉴别稻瘟病菌无毒基因AVR-Pik等位基因类型中的应用。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，具体包括如下步骤：

(1)使用分子标记CM-136进行检测，当稻瘟病菌携带有无毒基因AVR-Pik-A或B时，通过引物组合AP-1和AP-AB能扩增出DNA片段1和DNA片段2；当稻瘟病病菌携带有无毒基因AVR-Pik-D时，通过引物组合AP-2和AP-D能扩增出DNA片段1和DNA片段3；当稻瘟病菌携带有无毒基因AVR-Pik-C和E时，仅能扩增出DNA片段1；因此，利用分子标记CM-136将AVR-Pik-A、B、C、D和E分为3类，AVR-Pik-A和B组成一类，AVR-Pik-C和E组成一类，而AVR-Pik-D自成一类；

(2)使用分子标记CM-200进行检测，当稻瘟病菌携带有无毒基因AVR-Pik-A、B、D或E时，通过引物组合AP-1和AP-ABDE能扩增出DNA片段1和DNA片段4；当稻瘟病病菌携带有无毒基因AVR-Pik-C时，通过引物组合AP-2和AP-C能扩增出DNA片段1和DNA片段5；因此，利用分子标记CM-200将AVR-Pik-C与其他4个等位基因区分开；

(3)使用分子标记CM-234，当稻瘟病菌携带有无毒基因AVR-Pik-B时，通过引物组合AP-1和AP-B能扩增出DNA片段1和DNA片段6；当稻瘟病病菌携带有无毒基因AVR-Pik-A、C、D或E时，通过引物组合AP-2和AP-C能扩增出DNA片段1和DNA片段7；因此，利用分子标记CM-234将AVR-Pik-B与其他4种类型的等位基因区分开；

(4)通过对3个分子标记检测结果进行分析，鉴定出稻瘟病菌所携带的AVR-Pik的等位基因类型。