[发明专利]成纤维细胞上清液制备化妆品的方法及其用途

说明书

本发明涉及成纤维细胞上清液制备化妆品的方法及其用于面部皮肤的修复的用途，收集培养的成纤维细胞上清液，用于基底液、面膜、精华液化妆品的制备，在上清液中加入以基底液重量份计5~20%的甘油即制成基底液化妆品，在上清液中加入以精华液重量份计丁二醇量为3~10%、海藻糖量为5~10%即制成精华液化妆品，用上清液10~20ml浸泡面膜纸即制成面膜化妆品，化妆品中含有大量的胶原蛋白、弹性纤维、透明质酸钠及各种生长因子，将促使组织再生，对凹陷性疤痕、组织缺失有特殊功效，达到强力皮肤修复的目的。

技术领域

本发明涉及化妆品领域，具体涉及成纤维细胞上清液制备化妆品的方法及其用于面部皮肤的修复的用途。

背景技术

市场上的美容化妆品种类繁多，大部分化妆品是通过精细化工进行生产制备的，大都含有防腐剂、抑菌剂、香料等可能对肌肤有损害的物质，在使用此类化妆品时，会对部分人群的皮肤造成伤害，甚至会产生色斑、红血丝、过敏等问题。

近年来，化妆品行业还不断推出含细胞生长因子的化妆品，包括干细胞因子、表皮细胞生长因子、神经生长因子以及纤维母细胞生长因子等。但各种细胞因子需要在低温条件下保存，以保持其蛋白活性。然而在化妆品生产过程中，无法保证整个过程均处于低温条件，导致加入的细胞因子的失活和变性，从而失去细胞因子对组织和细胞的修复活性，同时，细胞因子加入到化妆品中，其有效浓度必然被降低，不能保证细胞因子对细胞核组织的修复效果。

成纤维细胞是皮肤真皮层的主要细胞，其可在真皮层产生胶原蛋白、弹性纤维蛋白以及其他细胞外基质，胶原蛋白和弹性蛋白在皮肤组织中的作用就是形成皮肤支架，保持皮肤弹性。吸纳水分，使皮肤细腻、光滑、富有弹性。

本发明就是利用自体皮肤成纤维细胞，通过体外培养，使其在上清液中分泌大量的生长因子、胶原蛋白及透明质酸钠等有效成分，将收集的上清液通过无菌分装后，直接用于面部皮肤，将对皮肤产生最佳的修复、再生、祛斑和抗氧化等美容作用。

发明内容

本发明的目的是提供一种成纤维细胞上清液制备化妆品的方法，以及制备成的化妆品用于面部皮肤修复的用途。

为了实现此目的，本发明采用了以下的技术方案：

本发明收集培养的成纤维细胞上清液，用于基底液、面膜、精华液化妆品的制备。

其中利用上清液制备基底液化妆品，其步骤是在上清液中加入以基底液重量份计5~20 %的甘油即制成基底液化妆品。

其中利用上清液制备精华液化妆品，其步骤是在上清液中加入以精华液重量份计丁二醇量为3~10%、海藻糖量为5~10%即制成精华液化妆品。

其中利用上清液制备面膜化妆品，其步骤是用上清液10~20ml浸泡面膜纸即制成面膜化妆品。

优选地，在成纤维细胞上清液中加入10%重量份的甘油，制备成的基底液效果最佳。

优选地，将面膜纸用15ml成纤维细胞上清液浸泡后，制备成的面膜效果最佳。

优选地，在成纤维细胞上清液中加入5%重量份丁二醇、10%重量份海藻糖，制备成的精华液效果最佳。

本发明中，以上制备化妆品使用的成纤维细胞上清液制备方法包括如下步骤：

1）无菌条件下，耳后取皮或眼睑取皮，去掉皮下组织血管，按体积比例10:1加入0.5%胰蛋白酶和0.2%EDTA，在37℃下消化2h，再加入1mg/mL的I型胶原蛋白酶，在37℃下消化1h，将上述消化液过200目筛网，吹打过滤获得成纤维细胞。

2）将上述细胞悬液加入含有KGF、PDGF及富血小板血浆（PRP）的DMEM/F12培养基中，在37℃、5%浓度的二氧化碳培养箱中培养48h，其中KGF活力单位为50U/mL，PDGF活力单位为100U/mL，PRP的浓度为10%。