[发明专利]犬瘟热病毒荧光EMA检测引物组、试剂盒和检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种犬瘟热病毒荧光EMA检测引物组、试剂盒和检测方法。

背景技术

犬瘟热(Canine Distemper)是由犬瘟热病毒(Canine Distemper virus，CDV)引起的一种高度接触性传染病，传染性极强，死亡率可高达80％以上，根据国家农业部于2008年12月11日公布的动物疫病名录统计，犬瘟热属三类动物疫病，主要感染犬科及猫科动物，传染渠道主要是通过与病兽直接接触传染，也可通过空气或食物传染，不属于人畜共患病。

犬瘟热在自然条件下，不同年龄、性别和品种的犬均可感染，但以未成年的幼犬最为易感。另有研究表明除犬科动物外，鼬科，浣熊科，大熊猫科等多种动物也可感染发病，是当前对宠物饲养业、毛皮动物养殖业和野生动物保护业危害最大的疫病之一。一旦犬群发生本病，除非在绝对隔离条件下，否则其他幼犬很难避免感染。

犬瘟传统检测手段主要为病毒分离培养，ELISA检测，免疫试纸条检测和RT-PCR检测等，但在这些检测方法中，病毒分离培养耗时较长，ELISA检测和免疫试纸条检测则存在灵敏度不高或特异性不强等问题，目前多项专利采用RT-PCR或LAMP方法，这些方法灵敏度和特异度都较高，但需要昂贵的仪器试剂，对操作者技术要求也较高，同时耗时较长，因此无法用于基层和现场检测。

发明内容

为解决以上技术问题，本发明提供一种犬瘟热病毒荧光EMA检测引物组、试剂盒及检测方法，特异性强、准确率高，操作简单、时间短、仪器要求低，能够实现快速、准确、低成本地检测犬瘟热病毒。

为达到上述目的，本发明的技术方案是：犬瘟热病毒荧光EMA检测引物组，包含上、下游引物和探针，所述上游引物是：5’-AAATCTGGCTTGATATTGTTAG-3’；所述下游引物是：5’-GAGCCGGATACATAGTTTCAA-3’；所述探针是5’-CCCCAGGGAACAAGCCTAC/i6-FAMdT/GA/idSp/A/iBHQ1dT/GATTTGT-3’ C3 Spacer。其中：“i6-FAMdT”指6-FAM(6-羧基荧光素)荧光标记的dT核苷酸，“idSp”指碱基缺失，“iBHQ1dT”指带有BHQ1淬灭基团标记的dT核苷酸，“C3 Spacer”指3’羟基封闭。

其中，所述引物组中的上、下游引物和探针可以是与权利要求1所述上、下游引物和探针的序列同源性大于85％的序列；或者是与权利要求1所述上、下游引物和探针的序列碱基互补的序列。

本发明还提供犬瘟热病毒荧光EMA检测试剂盒，所述试剂盒包括以下内容：

(1)复溶液；

(2)含引物的冻干酶管；所述引物包含上、下游引物和探针，所述上游引物是：5’-AAATCTGGCTTGATATTGTTAG-3’；所述下游引物是：5’-GAGCCGGATACATAGTTTCAA-3’；所述探针是5’-CCCCAGGGAACAAGCCTAC/i6-FAMdT/GA/idSp/A/iBHQldT/GATTTGT-3’ C3 Spacer；

(3)阳性对照品；

(4)阴性对照品。

其中，所述复溶液的成分如下：每30ml复溶液中含0.1-2M的MgAc₂ 840μL、0.1-2M pH8.0的Tris-Ac 3.00mL、0.1-2M的DTT 150μL、无RNase水26.01ml。

优选的，所述复溶液的成分如下：每30ml复溶液中含1-2M的MgAc₂ 840μL、1-2M pH8.0的Tris-Ac 3.00mL、1-2M的DTT 150μL、无RNase水26.01ml。