[发明专利]一种可稳定保存的肺癌甲基化基因检测试剂盒的质控品及应用

说明书

本发明公开了一种可稳定保存的肺癌甲基化基因检测试剂盒的质控品，其包含以下组分：阳性参考品、阴性参考品和检测限参考品。所述阳性参考品、阴性参考品和检测限参考品分别包含相应的DNA和DNA保存液。本发明提供的DNA保存液可以有效防止游离DNA的降解，为DNA提供稳定的环境，延长质控品的保存时间；本发明提供的含有本发明所述DNA保存液的DNA质控品具有制备成本低、性能稳定和易保存等优点，可有效地监控人员操作、仪器状态以及试剂盒有效性等因素，极大地提高了检测试剂盒的准确性和可靠性。

技术领域

本发明属于基因检测技术领域，具体涉及一种可稳定保存的肺癌甲基化基因检测试剂盒的质控品及应用。

背景技术

近年来DNA甲基化标志物在肺癌的早期诊断发挥越来越重要的作用，为发展无创性方法研究特异性在肺癌早期标志物奠定了基础。肺癌细胞可释放DNA到血液循环系统内，在癌症病人血清和血浆内可以检测到异常的较高浓度的循环DNA。通过比较研究发现，启动子区DNA甲基化在肺癌组织与对应血清、血浆样本中具有相似的改变模式，这表明血液样本内相关基因的表观遗传学变化可作为肿瘤早期筛选的标志物。目前已经发现一系列与肺癌相关的抑癌基因，由于发生异常甲基化而导致转录失活。抑癌基因启动子甲基化与肺癌发生发展的关系受到越来越多的重视。

目前检测甲基化最常用的技术有限制性酶切法、高分辨率熔解曲线法、亚硫酸氢钠测序法、DNA印迹法及经典的甲基化特异性PCR等。这些方法各有优缺点，根据标本来源和分子标志的不同，选择的检测方法有所差异。但都无法同时满足定量的精确性、高敏感性、高通量、低假阳性和假阴性，低成本和低污染的要求。在众多诊断技术中，基因测序是最直观、最准确的方法之一。分子生物学的飞速发展及基因治疗的出现为肺癌的早期诊断、有效治疗提供了新的依据。肺癌有很多驱动基因，不同病人甲基化的发生几率不一样，因此需要对多基因、多位点同时检测。采用高通量靶向测序方法有目的的研究基因组的特定区域，这是一种大规模的多重PCR扩增方法，能够实现几千甚至上万种引物对目标区域低频率或稀有突变的检测。使用肺癌甲基化检测试剂盒的检测样本类型包括新鲜的或经甲醛固定石蜡包埋(Formalin-Fixed and Parrffin-Embedded，FFPE)的组织样本，能提供更高的通量和更广泛的目标区域覆盖度，可同时筛选p16、RASSF1A、CDH1和CDH13等多种基因，同时保证临床实验室对数据结果高质量和高可信度的需求。

目前，市面上并没有经济、有效、稳定通用的肺癌甲基化检测试剂盒的质控品销售，而质控品又是评价和验证一款试剂盒检测准确性和稳定性等性能的重要方法和质量指标。但常规的质控品非常容易降解，而作为检测肺癌甲基化的质控品，其准确性和稳定性是个难以解决的大问题。

发明内容

基于此，本发明的目的在于克服上述现有技术的不足之处而提供一种DNA保存液，可以有效防止游离DNA的降解，为DNA提供稳定的环境，延长质控品的保存时间。

为实现上述目的，本发明采取的技术方案为：一种DNA保存液，金精三甲酸铵盐、甘氨酸和苯丁抑制素盐酸盐；且所述金精三甲酸铵盐、甘氨酸和苯丁抑制素盐酸盐的摩尔比为(100～500)：(50000～150000)：(0.02～0.06)。

优选地，所述金精三甲酸铵盐、甘氨酸和苯丁抑制素盐酸盐的摩尔比为300：80000：0.04。

本发明还提供了所述DNA保存液在DNA保存中的用途。

本发明所述DNA保存液可用于制备基因甲基化检测试剂盒的质控品。

本发明的又一目的，在于提供一种可稳定保存的肺癌甲基化基因检测试剂盒的质控品。

为实现上述目的，本发明采取的技术方案为：一种可稳定保存的肺癌甲基化基因检测试剂盒的质控品，其包含以下组分：阳性参考品、阴性参考品和检测限参考品；

所述阳性参考品包含目标基因发生甲基化修饰的DNA和所述的DNA保存液；