[发明专利]提升水稻籽粒淀粉品质的方法

权利要求书

1.一种提升水稻籽粒淀粉品质的方法，其特征在于，包括以下步骤：

A.重组载体构建；

B.转化农杆菌的建立；

C.获得独立转化植株；

D.选择纯合单株；

E.选留的纯合单株进行表型选择。

2.根据权利要求1所述提升水稻籽粒淀粉品质的方法，其特征在于，所述A.重组载体构建，进一步包括：

(1)T4连接酶连接形成重组载体；

(2)重组载体转化；

(3)挑选连接正确的质粒转化农杆菌。

3.根据权利要求2所述提升水稻籽粒淀粉品质的方法，其特征在于，所述步骤进一步包括：

(1)将带谷蛋白GluB-1启动子Glb的质粒Puc18-Glb酶切，分离回收目的片段，与酶切后的pCAMBIA1300上用T4连接酶连接形成中间载体，再将SBE1基因的cDNA片段酶切，分离回收目标片段，与酶切过中间载体用T4连接酶连接形成重组载体。

4.根据权利要求2所述提升水稻籽粒淀粉品质的方法，其特征在于，所述步骤进一步包括：

(2)将重组载体转化大肠杆菌感受态DH5α，在抗性培养基上挑选白色单菌落。

5.根据权利要求2所述提升水稻籽粒淀粉品质的方法，其特征在于，所述步骤进一步包括：

(3)将挑选的白色单菌落富集抽提DNA，酶切后电泳检测，挑选连接正确的质粒转化农杆菌EHA105。

6.根据权利要求1～5中任一项所述提升水稻籽粒淀粉品质的方法，其特征在于，所述B.转化农杆菌的建立，进一步包括：

(1)、诱导；

(2)、继代；

(3)、预培养；

(4)、农杆菌培养；

(5)、侵染；

(6)、筛选；

(7)、分化；

(8)、生根；

(9)、移栽。

7.根据权利要求6所述提升水稻籽粒淀粉品质的方法，其特征在于，所述B.转化农杆菌的建立，进一步包括：

(1)、诱导：将成熟的水稻种子去壳，然后依次用70％体积比的乙醇处理1min，2％浓度的次氯酸钠种子表面消毒15min；用灭菌水洗种子4-5次；将种子放在粳稻诱导培养基上；将接种后的培养基放置于黑暗处培养4周，温度26℃。

8.根据权利要求6所述提升水稻籽粒淀粉品质的方法，其特征在于，所述B.转化农杆菌的建立，进一步包括：

(2)、继代：挑选亮黄色、紧实且相对干燥的胚性愈伤，放于粳稻继代培养基上黑暗，26℃条件下培养2-3周。

9.根据权利要求6所述提升水稻籽粒淀粉品质的方法，其特征在于，所述B.转化农杆菌的建立，进一步包括：

(3)、预培养：挑选紧实且相对干燥的胚性愈伤，放于粳稻预培养基上黑暗，26℃条件下培养4-5天。

10.根据权利要求6所述提升水稻籽粒淀粉品质的方法，其特征在于，所述B.转化农杆菌的建立，进一步包括：

(4)、农杆菌培养：在带有卡那霉素抗性选择的PEB培养基上预培养农杆菌株两天，温度28℃；刮取农杆菌至悬浮培养基中悬浮培养，培养温度为28℃。