[发明专利]一种CD133质谱流式抗体、制备方法及应用

权利要求书

1.一种CD133质谱流式抗体，其特征在于，所述CD133质谱流式抗体是以镧系金属溶液和CD133纯抗体为原料，将镧系金属负荷到CD133纯抗体上后制备而成的。

2.根据权利要求1所述的CD133质谱流式抗体制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1，制备金属负荷物溶液：配制镧系金属溶液，37℃孵育30-40min，得到金属负荷物溶液；

S2，CD133抗体还原：向截留分子量50kDa离心超滤管中加入R-Buffer和CD133纯抗体，混匀，离心，弃上清，向得到的沉淀中加入TCEP-R-Buffer，混匀，37℃孵育15-30min，得到还原的抗体溶液；

其中，每1000μL的TCEP-R-Buffer的配制方法如下：向8μL 0.5M TCEP溶液中加入992μLR-Buffer，混匀；

S3，纯化金属负荷物：向截留分子量3kDa离心超滤管中加入L-Buffer，再加入S1得到的金属负荷物溶液，混匀，离心，继续加入C-Buffer，混匀，离心，回收沉淀；

S4，纯化CD133抗体：向S2获得的抗体溶液中加入C-Buffer，离心，弃上清，然后再加入C-Buffer混匀，离心，弃上清，回收的沉淀，该沉淀为纯化的CD133抗体；

S5，制备CD133抗体复合物：用C-Buffer重悬S3中回收的沉淀，并将重悬液与S4中得到的纯化的CD133抗体混匀，37℃孵育60-120min，得到CD133抗体复合物；

S6，清洗CD133抗体复合物：用W-Buffer清洗S5中得到的CD133抗体复合物，得到干净的CD133质谱流式抗体；

其中R-Buffer的作用是抗体缓冲液；L-Buffer和C-Buffer的作用是镧系金属缓冲液；W-Buffer的作用是清洗液。

3.根据权利要求2所述的CD133质谱流式抗体制备方法，其特征在于，S1中，所述镧系金属溶液的终浓度为2.5mM，所述镧系金属为氯化镱或者氯化镧。

4.根据权利要求3所述的CD133质谱流式抗体制备方法，其特征在于，S2中，R-Buffer∶CD133纯抗体∶TCEP-R-Buffer的体积比例为300∶100-200∶100。

5.根据权利要求4所述的CD133质谱流式抗体制备方法，其特征在于，S3中，金属负荷物溶液、L-Buffer和C-Buffer的体积比例为100∶200∶300。

6.根据权利要求5所述的CD133质谱流式抗体制备方法，其特征在于，S4中，第一次加入的C-Buffer、第二次加入的C-Buffer以及S2中加入的TCEP-R-Buffer的体积比例为300∶400-500∶100。

7.根据权利要求2所述的CD133质谱流式抗体制备方法，其特征在于，S6的具体步骤如下：向S5得到的含有CD133抗体复合物的50kDa离心超滤管中加入300μL W-Buffer，混匀，12,000g离心10min，弃上清，再用400μLW-Buffer洗涤沉淀三次，最后加入50μL W-buffer，冲洗，收集超滤管内溶液A；然后将该离心超滤管1000g离心2min，再用50μL W-buffer冲洗管壁，收集超滤管内溶液B，合并超滤管内溶液A和溶液B，得到干净的CD133质谱流式抗体。

8.根据权利要求1所述的CD133质谱流式抗体作为质谱流式检测干细胞标志物的应用。

9.根据权利要求2所述的方法在制备质谱流式检测干细胞标志物中的应用。