[发明专利]诱导多能干细胞分化成造血干细胞的培养基及方法有效
| 申请号： | 201711500054.4 | 申请日： | 2017-12-29 |
| 公开（公告）号： | CN108588024B | 公开（公告）日： | 2020-04-21 |
| 发明（设计）人： | 孙筱放;冼业星;宋兵;陈玉嫦;欧阳曙明;谢玉欢 | 申请（专利权）人： | 广州医科大学附属第三医院（广州重症孕产妇救治中心;广州柔济医院） |
| 主分类号： | C12N5/0789 | 分类号： | C12N5/0789 |
| 代理公司： | 广州华进联合专利商标代理有限公司 44224 | 代理人： | 李悦 |
| 地址： | 510150 广*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 诱导 多能 干细胞 化成 造血 培养基 方法 | ||
1.一种诱导多能干细胞分化成造血干细胞的培养基，其特征在于，包括第一阶段培养基和第二阶段培养基；
所述的第一阶段培养基为含5-15％胎牛血清、90-110μmol/L硫代甘油的a-MEM培养基中添加有终浓度为35-45ng/mL的SCF、终浓度为15-25ng/mL的BMP4、终浓度为15-25ng/mL的IL-3、终浓度为15-25ng/mL的VEGF、终浓度为15-25ng/mL的Flt3；
所述的第二阶段培养基为含5-15％胎牛血清、90-110μmol/L硫代甘油的a-MEM培养基中添加有终浓度为35-45ng/mL的SCF、终浓度为15-25ng/mL的BMP4、终浓度为15-25ng/mL的IL-3、终浓度为15-25ng/mL的VEGF、终浓度为15-25ng/mL的Flt3，以及终浓度为80-120ng/mL的UM171；所述第一阶段培养基中，所述SCF、BMP4、IL-3、VEGF、Flt3的终浓度比为(1.5-2.5)：(0.5-1.5)：(0.5-1.5)：(0.5-1.5)：(0.5-1.5)；所述第二阶段培养基中，所述SCF、BMP4、IL-3、VEGF、Flt3、UM171的终浓度比为(1.5-2.5)：(0.5-1.5)：(0.5-1.5)：(0.5-1.5)：(0.5-1.5)：(4.5-5.5)。
2.根据权利要求1所述的诱导多能干细胞分化成造血干细胞的培养基，其特征在于，所述第一阶段培养基中，所述SCF、BMP4、IL-3、VEGF、Flt3的终浓度比为2：1：1：1：1；所述第二阶段培养基中，所述SCF、BMP4、IL-3、VEGF、Flt3、UM171的终浓度比为2：1：1：1：1：5。
3.根据权利要求1所述的诱导多能干细胞分化成造血干细胞的培养基，其特征在于，所述的第一阶段培养基为含10％胎牛血清、100μmol/L硫代甘油的a-MEM培养基中添加有终浓度为40ng/mL的SCF、终浓度为20ng/mL的BMP4、终浓度为20ng/mL的IL-3、终浓度为20ng/mL的VEGF、终浓度为20ng/mL的Flt3；
所述的第二阶段培养基为含10％胎牛血清、100μmol/L硫代甘油的a-MEM培养基中添加有终浓度为40ng/mL的SCF、终浓度为20ng/mL的BMP4、终浓度为20ng/mL的IL-3、终浓度为20ng/mL的VEGF、终浓度为20ng/mL的Flt3，以及终浓度为100ng/mL的UM171。
4.一种诱导多能干细胞分化成造血干细胞的方法，其特征在于，包括：
将多能干细胞和OP9细胞先置于权利要求1至3任一项所述的第一阶段培养基中进行第一阶段的诱导分化，再置于权利要求1至3任一项所述的第二阶段培养基中进行第二阶段的诱导分化。
5.根据权利要求4所述的诱导多能干细胞分化成造血干细胞的方法，其特征在于，将多能干细胞和OP9细胞共同接种于第一阶段培养基记为第0天，所述第一阶段的诱导分化自第0天开始至第3天结束，所述第二阶段的诱导分化自第4天开始至第14天结束。
6.根据权利要求4或5所述的诱导多能干细胞分化成造血干细胞的方法，其特征在于，所述第一阶段的诱导分化的第1天全量更换新鲜培养基，自所述第一阶段的诱导分化起第4天开始，隔天半量更换为新鲜的培养基。
7.根据权利要求4或5所述的诱导多能干细胞分化成造血干细胞的方法，其特征在于，所述OP9细胞是于含15-25％胎牛血清的α-MEM培养基中培养4-5d获得的。
8.根据权利要求4或5所述的诱导多能干细胞分化成造血干细胞的方法，其特征在于，所述OP9细胞与多能干细胞的数量比为(12-18):1。
9.根据权利要求8所述的诱导多能干细胞分化成造血干细胞的方法，其特征在于，所述OP9细胞与多能干细胞的数量比为12：1或者18:1。
10.根据权利要求4或5所述的诱导多能干细胞分化成造血干细胞的方法，其特征在于，所述多能干细胞为诱导多能干细胞。
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