[发明专利]假单胞菌多肽、抗体捕获器件及试剂盒

说明书

本发明公开一种SEQ ID：1所示假单胞菌多肽的核心序列、含核心序列的假单胞菌多肽、抗体捕获器件、试剂盒及检测方法，属于免疫学技术领域。本发明的技术方案是克隆表达含有SEQ ID：1核心序列的假单胞菌多肽，通过固相载体及其上含核心序列的多肽捕获样本中的抗体，达到辅助诊断自体免疫性肠病的作用。

技术领域

本发明涉及一种假单胞菌多肽的核心序列，及其包含多肽的抗体捕获器和试剂盒，属于 免疫学检测技术领域。

背景技术

炎症性肠病(inflammatory bowel disease，IBD)是一种自体免疫性肠病，包括溃疡性结 肠炎(ulcerative colitis，UC)和克罗恩病(Crohn’s disease，CD)，近10多年来在我国发病 率呈逐步增高趋势。IBD的临床表现复杂多样，不仅有消化道症状，还可有肠外表现。由于 症状为腹痛、腹泻、便血等非特异性肠炎表现，CD与UC，以及IBD与结核性肠炎等其他肠道 慢性疾病很难鉴别诊断。血清学指标有助于鉴别CD与UC，以及IBD与非IBD。

IBD的发病机理复杂，其中之一的机制是由于遗传、环境等因素影响，使肠道粘膜的屏 障功能障碍，免疫系统对正常肠道存在的抗原产品免疫反应，表现为体内可检测到对肠道微 生物抗原及代谢物的抗体。通过对这些抗体的检测，可辅助诊断自体免疫学肠病包括IBD。 目前已明确的具有IBD辅助诊断作用的抗微生物抗体包括抗CBirl抗体、抗Fla-X抗体、抗 4aFla-2抗体等细菌鞭毛抗体，以及抗荧光假单胞菌I2抗体和抗大肠杆菌外膜孔道蛋白OmpC 抗体等。由于微生物基因的易变异性和多态性，新的微生物抗原不断出现，其中一些参与肠 道粘膜的免疫调节。本发明所公布的假单胞菌多肽与对比文献CN 103175971B公布的多肽序 列不同。经过序列分析，发现与假单胞菌自身抗体产生有关的是某些核心序列，含有该核心 序列的假单胞菌多肽经临床确诊的患者样本验证，具有鉴别健康人与IBD的能力。

发明内容

本发明的第一方面，公布SEQ ID：1所示的假单胞菌多肽及三个核心序列，连接核心序列 之间的氨基酸序列xxx可有多种变异，如SEQ ID：2、SEQ ID：3和SEQ ID：4所示。

本发明的第二方面，提供一种抗体捕获器件的制备方法，把所述的假单胞菌多肽直接或 间接固定在固相载体上，用于捕获样本中的抗假单胞菌抗体。

固相载体包括微孔板、荧光微球、乳胶微球、树脂微球、磁性微球、薄膜、微孔膜、硝酸纤维素膜等。

一个优选例中，固相载体为微孔板，另一个优选例中为磁性微球，第3个优选例中同时 选了荧光微球和硝酸纤维膜，第4个优选例中为胶体金。

多肽固定在固相载体的方法是直接包被或通过载体蛋白间接包被，优选地，载体蛋白为 BSA，或者生物素-链酶亲和素。

一个优选例中，把所述多肽与BSA偶联，然后再包被在固相载体上。

另一个优选例中，先把多肽与生物素反应，然后把生物素化的多肽与链霉亲和素偶联， 形成多肽与链亲合素的复合物，再把复合物包被在固相载体上。

本发明的第三方面，公开前述的假单胞菌多肽、抗体捕获器件组成的自体免疫性肠病检 测试剂盒及测定方法，本发明所述的试剂盒和方法是基于免疫学反应，对样本中抗假单胞菌 抗体的测定方法，包括如下步骤：

(1)待检测样本作用于抗体捕获器件，使样本中的抗假单胞菌抗体与抗体捕获器件上的多 肽结合；(2)通过标记物测定样品中抗假单胞菌多肽抗体的含量。

假单胞菌抗原或抗原表位偶联物可通过目前任何一种免疫学检测方法检测样本中的抗假 单胞菌抗体，比如ELISA、板式化学发光、化学发光、免疫层析、免疫渗滤等等，所对应的标 记物分别为辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶、吖啶酯、稀土元素和胶体金等。