[实用新型]一种呕吐毒素直接竞争ELISA试剂盒

说明书

技术领域

本实用新型属于免疫化学检测技术领域，具体涉及一种呕吐毒素直接竞争ELISA试剂盒。

背景技术

呕吐毒素（vomitoxin）又名脱氧雪腐镰刀菌烯醇（deoxynivalenol，DON），具有很强的细胞毒性，可导致动物肠功能紊乱，口腔黏膜和真皮损伤，免疫力下降。人和牲畜误食被毒素污染的粮谷后产生广泛的毒性效应，可引起呕吐、拒食、体重减轻等症状，免疫和造血系统受到损害，还具有很强的皮肤毒性和细胞毒性，严重时可损害造血系统造成死亡。DON多分布于小麦、大麦、玉米等谷物籽实中，是在黄曲霉毒素之后污染最严重的真菌毒素。由于DON的危害严重，引起了各国的普遍重视，相继制定了谷物及饲料中DON残留量的严格限量标准。我国谷物、猪配合饲料、犊牛配合饲料、泌乳期动物配合饲料中DON的限量标准为1.0mg/kg，牛配合饲料、家禽配合饲料中DON的限量标准为5.0mg/kg。

DON残留检测的传统方法有微生物学法，荧光法，薄层色谱法( TLC)，高效液相色谱法（HPLC），以及液质联用法（LC-MS），气质联用检测法（GC-MS）和液相色谱－串联质谱法（LC-MS/MS）等方法。这些方法灵敏度高，定性准确，可以确定化合物的分子量、分子式，甚至官能团，适合定量检测该化合物及其代谢物。但这些方法成本高，需要专业的技术人员，昂贵的实验仪器及长时间的前期准备工作。而免疫学检测方法建立在抗体对抗原的分子识别上，其主要优点是亲合力高、快速、简单、经济实用，能够实现对生物液体的小体积、大通量检测，逐渐成为世界各国有毒有害残留物快速检测的方法之一。

因此，研制快速、灵敏、高效的呕吐毒素直接竞争ELISA试剂盒对于保障动物性食品安全具有十分重要的意义。

发明内容

本实用新型解决的技术问题是提供了一种小巧轻便的呕吐毒素直接竞争ELISA试剂盒，使用该试剂盒操作简便，灵敏度高，成本低，稳定性好，检测步骤少，检测时间短，可进行一次连续多个样品中呕吐毒素含量的测定，减少了样品检测所需要的时间。

本实用新型为解决上述技术问题采用如下技术方案，一种呕吐毒素直接竞争ELISA试剂盒，包括盒体、连接于盒体一侧的盒盖、设置于盒体内侧底部的固定座及设置于盒体内部的酶标板、微吸管、离心管、比色卡、说明书和盖板膜，其特征在于：所述的酶标板由聚苯乙烯制成，采用96孔试剂板作为固相载体，放于铝铂袋内，并且酶标板由外框支撑架和放置其上的可拆装酶标反应微孔条组成，每个可拆装酶标反应微孔条有12个反应孔，其上预包被抗呕吐毒素单克隆抗体；所述的微吸管有四种不同容量，其中1.0mL容量的微吸管30根用于样品基质的采样，100µL容量的微吸管10根用于添加终止液，50µL容量的微吸管20根用于添加酶标二抗工作液，30µL容量的微吸管40根用于添加底物显色剂A液和底物显色剂B液；所述的离心管有三种不同容量，分别为10mL、5mL和1.5mL，用于样品采集和基质前处理；所述的比色卡有5张，显示不同颜色试剂孔对应的吸光度值，用于水样、奶制品、茶叶、饲料和食品中呕吐毒素残留含量的推算；所述的说明书用于介绍试剂盒的原理、标准曲线、适用范围、交叉反应率、所需仪器和试剂、使用方法和注意事项；所述的盖板膜5张，用于样品检测时覆盖酶标板以防止液体蒸发影响检测结果；所述的固定座上设有12个试剂瓶下凹瓶位和2个备用试剂瓶下凹瓶位，其中12个试剂瓶下凹瓶位分别用于放置浓缩洗涤液试剂瓶、样品稀释液试剂瓶、酶标二抗工作液试剂瓶、底物显色剂A液试剂瓶、底物显色剂B液试剂瓶、终止液试剂瓶、200ng/mL的呕吐毒素标准品溶液试剂瓶、100ng/mL的呕吐毒素标准品溶液试剂瓶、50ng/mL的呕吐毒素标准品溶液试剂瓶、25ng/mL的呕吐毒素标准品溶液试剂瓶、12.5ng/mL的呕吐毒素标准品溶液试剂瓶和6.25ng/mL的呕吐毒素标准品溶液试剂瓶，2个备用试剂瓶下凹瓶位分别用于放置高浓度标准品溶液试剂瓶、稀酸溶液试剂瓶、稀碱溶液试剂瓶或吐温-20溶液试剂瓶。

本实用新型用不同大小、不同颜色的塑料瓶盛装液体并固定在盒体内侧底部的固定座上，与酶标板、微吸管、离心管、比色卡、说明书和盖板膜一同封装在试剂盒内，便于携带和运输。每一个试剂盒中的试剂足够进行96份测定，即可进行一次连续多个样品的检测，也可将酶标板微孔条拆开多次使用。此时，将剩下的微孔条放回铝箔袋中用自封袋密封，这样可以保证试剂盒检测结果的准确性和稳定性。