[实用新型]一种脐血造血干细胞冻存管

说明书

技术领域

本实用新型属于干细胞领域，具体涉及一种脐血造血干细胞冻存管。

背景技术

脐血干细胞是脐血中的一种具有分化潜能的原始细胞，具备自我更新和增殖的能力，并能在特定因素的影响或诱导下，向各种细胞或组织分化。脐血造血干/祖细胞具有高度的自我更新能力或复制能力，能保持干细胞数量恒定，并能进一步分化为各系祖细胞及成熟细胞。CD34抗原是分离纯化造血干/祖细胞的主要标志，脐血中的CD34+细胞群在数量、质量和增殖能力方面高于外周血，脐血中的造血干/祖细胞具有更原始、更强的增殖分化能力。近年来，脐血造血干细胞移植已发展为一种高科技生物治疗手段，广泛应用于许多疾病的治疗，包括恶性血液病、自身免疫性疾病、严重免疫缺陷症等，临床证明具有一定的疗效。

冷冻保存是脐血保存和造血干细胞移植的关键。已知，脐血干细胞在液氮中冻存6个月、1年、2年后的数量和活性无明显变化，冻存效果较好，因而建议脐血干细胞长期保存应置于液氮中。鉴于-80℃冻存的方法方便、成本较低、应用广泛，6个月以内的冻存采用-80℃冻存更为方便。徐长根等研究(-80℃下不同冻存时间对脐血造血干细胞保存效果的影响，临床输血与检验2010年4月第12卷第2期)发现，脐血细胞在-80℃下保存1、2、3、4、8周后，各组的有核细胞数和CD34+数的差异无统计学意义，而在冻存16、32周后较1周的差异有统计学意义(P<0.05)。台盼蓝拒染率在8、16、32周较1周的差异均有统计学意义(P<0.05)。

发明内容

本实用新型的目的在于克服现有技术的不足，提供一种脐血造血干细胞冻存管，用于脐血造血干细胞在-80℃条件下6个月以内的有效冻存。

上述目的是通过如下技术方案实现的：

一种脐血造血干细胞冻存管，包括冻存管主体，该冻存管主体的内壁设有包被层，包被层为γ聚谷氨酸材质。

优选地，所述γ聚谷氨酸的分子量为70万克/摩尔。

优选地，γ聚谷氨酸包被层的厚度为0.2-0.4mm。

一种制备上述脐血造血干细胞冻存管的方法，包括如下步骤：

步骤S1，将无菌γ聚谷氨酸溶于无菌水中，制成浓度为0.1-0.2mg/mL的γ聚谷氨酸溶液，用0.22μm滤膜过滤，备用；

步骤S2，取上述γ聚谷氨酸溶液加入市售冻存管中，置于35-45℃无菌条件静置2-4小时；

步骤S3，倾倒冻存管中剩余溶液，用无菌水清洗2-3次，置于无菌条件备用。

本实用新型的有益效果：

本实用新型提供的冻存管内壁含有γ聚谷氨酸包被层，使用本实用新型冻存管冻存脐血造血干细胞时，-80℃冻存6个月细胞数量和活性无明显下降，显著优于现有技术。因此，脐血造血干细胞6个月内的短期保存可以使用本实用新型提供的冻存管在-80℃冻存；超过6个月的长期冻存建议使用液氮保存。

附图说明

图1为本实用新型冻存管结构示意图，图中1为γ聚谷氨酸包被层；

图2为包被冻存组和常规冻存组6个月冻存期内台盼蓝拒染率变化。

具体实施方式

下面结合具体实施例和附图详细介绍本实用新型的技术方案和技术效果。未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，例如教科书和实验指南中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件，为本领域普通技术人员熟知或易于获知。

实施例1本实用新型冻存管的制备

取市售2mL康宁冻存管自制本实用新型提供的冻存管，具体步骤如下：

步骤S1，将无菌γ聚谷氨酸(采用γ射线钴60照射灭菌，分子量70万克/摩尔)溶于无菌水中，制成浓度为0.15mg/mL的γ聚谷氨酸溶液，用0.22μm滤膜过滤，备用；

步骤S2，取2mLγ聚谷氨酸溶液加入2mL康宁冻存管中，于40℃无菌条件静置3小时；

步骤S3，倾倒冻存管中剩余溶液，用无菌水清洗3次，置于无菌条件备用。

显微镜观察显示，冻存管内壁形成均匀的γ聚谷氨酸包被层，包被层厚度0.3mm。

γ聚谷氨酸溶液的浓度可以在0.1-0.2mg/mL之间调整，静置温度在35-45℃之间调整，静置时间4-5小时，最终获得的包被冻存管内壁的γ聚谷氨酸包被层厚度在0.2-0.4mm之间。

其他规格的冻存管制备方法类似。

当然，为了提高科研人员的工作效率，可以制备成预包被冻存管成品销售给科研人员。

实施例2冻存管内壁包被对冻存效果的影响

一、实验方法