[实用新型]一种猪伪狂犬病毒抗体检测试剂盒

说明书

本实用新型公开了一种猪伪狂犬病毒抗体检测试剂盒，所述试剂盒有一个盒体，盒体内设有抗原包被反应板存放槽、样品稀释板存放槽、猪伪狂犬病毒gD蛋白抗体阳性对照液孔槽、猪伪狂犬病毒gB蛋白抗体阳性对照液孔槽、猪伪狂犬病毒gE蛋白抗体阳性对照液孔槽、猪伪狂犬病毒gD蛋白、gB蛋白和gE蛋白抗体阴性对照液孔槽、样品稀释液孔槽、酶结合物孔槽、浓缩洗涤液孔槽、TMB显色液、终止液孔槽和操作说明书存放槽；抗原包被反应板分为检测区I、检测区II和检测区III，检测区I、检测区II和检测区III分别包被猪伪狂犬病毒gD蛋白、gB蛋白和gE蛋白抗原。本试剂盒可用于鉴别诊断和评估亚单位疫苗的免疫效果，具有灵敏度高、特异性好、快速检测大批量样品等优点。

技术领域

本实用新型属于兽用疫病检测技术领域，具体涉及一种猪伪狂犬病毒抗体检测试剂盒。

背景技术

猪伪狂犬病是由猪伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus，PRV)引起的猪的急性传染病。该病在猪呈暴发性流行。可引起妊娠母猪流产、死胎、木乃伊胎，公猪不育，新生仔猪大量死亡，育肥猪呼吸困难、生长停滞等，是危害全球养猪业的重大传染病之一。

目前该病的预防主要通过疫苗免疫，目前市场上流行的主要是第二代基因工程基因缺失疫苗。该疫苗除了在TK基因引入了一个缺失外，在非编码必需糖蛋白的基因内引入了一个新的缺失，或插入一个报告基因，这样得到的突变株就不能产生被缺失的糖蛋白，因而免疫动物就不能产生相应的抗体，因此可以通过血清学方法将免疫接种猪与自然感染野毒的猪相区别。目前，市场上使用最多的是gB抗体检测和gE抗体检测结合来区别弱毒疫苗免疫和野毒感染，这是因为现在的弱毒疫苗一般都是缺少TK基因和gE基因，而含有gB基因。但是，弱毒疫苗是一种活疫苗，在免疫后，会在猪体内增殖，这不利于猪场对PRV的净化。

伪狂犬病毒属于疱疹病毒科(Herpesviridae)、猪疱疹病毒属，病毒粒子为圆形，直径150～180nm，核衣壳直径为105～110nm。病毒粒子的最外层是病毒囊膜，它是由宿主细胞衍生而来的脂质双层结构。囊膜表面有长约8～10nm呈放射状排列的纤突。伪狂犬病毒基因组是线状双链DNA分子，大小约150kb，平均G+C含量高达74％，具有典型的疱疹病毒基因组结构特征，由独特长区段、独特短区段及位于US两侧的末端重复序列(TR)和内部重复序列(IR)组成。目前已发现11种PRV糖蛋白，其中，gB、gC、gD均为刺激机体产生中和抗体的蛋白，所产生的抗体无论是在体内、体外，还是在有无补体存在的情况下都有中和PRV的能力，因此，gB、gC、gD是研制PRV亚单位疫苗的首选糖蛋白。亚单位疫苗的优点：不含有核酸物质因此比较安全；接种后不会产生持续感染或潜伏感染；产生的免疫应答可以与野毒感染相区分，有利于疫病的控制和消灭。鉴于亚单位疫苗的这些优点，本发明人研发了gD蛋白亚单位疫苗，该亚单位疫苗具有良好的免疫原性且生产成本低。具体见本发明人申请的申请号为201710551363.8的中国发明专利申请。

为了区别本发明人的亚单位疫苗免疫和野毒感染以及弱毒疫苗免疫(在没有野毒感染的情况下，可区分是否有弱毒疫苗免疫)，本发明人开发了一种猪伪狂犬病毒抗体检测试剂盒。该试剂盒能够同时检测gD蛋白抗体、gB蛋白抗体和gE蛋白抗体，克服现有技术不能同时检测的不足，也能够减少分开检测所带来的误差。

实用新型内容

本实用新型的目的是为了提供一种快速、有效、同时检测猪伪狂犬病毒gD蛋白、gB蛋白和gE蛋白抗体的间接ELISA检测试剂盒，为实验动物筛选、猪场PRV净化提供新的快捷高效的工具；同时能够区别gD蛋白制备的亚单位疫苗免疫、市场上的弱毒疫苗免疫(在没有野毒感染的情况下，能够区分gD蛋白亚单位疫苗免疫和弱毒疫苗免疫)或野毒感染；还能进一步减少分开检测时带来的误差。