[实用新型]一种人EGFR基因四重多位点突变检测试剂盒

说明书

技术领域

本实用新型涉及一种EGFR基因四重多位点突变检测试剂盒，属于生物医学核酸检测试剂盒技术领域。

背景技术

近年来针对EGFR基因为分子靶点的癌症治疗的地位越来越受到国内外的重视。许多研究显示EGFR基因突变与TKI药物的疗效密切相关。EGFR基因突变已成为癌症患者是否对TKI药物敏感的强预测因子。其中，EGFR基因突变包括四种情况，EGFR基因的20外显子第790位点蛋氨酸(M)替代苏氨酸(T)的T790M突变、外显子21上的替代突变(L858R和L861Q)以及外显子19缺失突变的。美国FDA以及NCCN指南已规定TKI药物的治疗必须依据EGFR基因检测结果选择治疗对象，筛选最合适的患者进行有针对性的靶向治疗，以提高药物疗效。因此，检测EGFR基因的突变状态是决定患者是否能够应用EGFR-TKI药物治疗的先决条件。目前，基因突变检测方法主要有一代测序法和基于实时定量PCR的ARMS两种方法。一代测序又被称为Sanger测序，其检测周期长(需要1-2天)，且灵敏度低，仅能检测到10％以上的突变。ARMS法又称为扩增阻碍突变系统(Amplification Refractory Mutation System，ARMS)。由于其检测方便快速，ARMS法已成为基因突变检测最常用的方法，但其灵敏度仅为1％。但是肿瘤组织样本获取难度较高，难以满足动态监测的需要，因此，基于血液样本的液态活检技术成为肿瘤组织检测的重要补充样本。血液检测除了可用于筛选EGFR-TKIs的适治患者，还可以动态监测靶向治疗过程中肿瘤标志物的变化，特别是可用于发现新出现的耐药相关基因的变异。与肿瘤组织相比，血液检测EGFR基因突变具有高度的特异性(IPASS、IFUM和IGNITE研究中特异性分别是100％、99.8％和97.2％)，但敏感性都较低(IPASS、IFUM和IGNITE研究中敏感性分别是43.1％、65.7％和49.6％)。因此，利用血液进行液态活检，在具有高度检测特异性的同时，提高灵敏度的检测技术对于EGFR基因耐药突变检测尤为重要。

目前市场上还没有一种完全适用于临床需求的能够快速简便以及灵敏准确同时检测EGFR基因T790M、L858R、L861Q、19缺失四种突变的试剂盒。为了有效提高EGFR基因突变检测灵敏度，非常有必要提供一种基于液态活检的EGFR基因多突变的高灵敏检测方法，以满足越来越细化的临床精准医疗的迫切需求。

实用新型内容

针对现有EGFR检测试剂盒的不足，本实用新型提供了一种能够简单快速高灵敏度检测EGFR基 因四重22个突变位点的试剂盒。

为了实现上述目的，本实用新型所采用的技术解决方案：

一种人EGFR基因四重多位点突变检测试剂盒，其特征在于，包括两个盒体，盒体A包括：1个带有关门式磁扣盒盖的盒体、1个固定海绵衬底、1个装有无核酸酶的超纯去离子水的1.5mL离心管、1个装有T790M检测引物及探针混合物的1.5mL离心管、1个装有L858R和L861Q检测引物及探针混合物的1.5mL离心管、1个装有19外显子缺失检测引物及探针混合物的1.5mL离心管、1个装有阳性质控物的1.5mL离心管、1个装有阴性质控物的1.5mL离心管、12个八连管；所述的八连管，为每个管带有独立的管盖，并分别装有相同体积的数字PCR反应预混液。盒体B包括：1个带盒盖的盒体、1个光滑玻璃纸衬底、1个卡槽隔盒、1张光盘、1套数字PCR芯片。

其中，盒体A中所述关门式磁扣盒盖为独立的左盒盖和右盒盖两个盒盖组成，两个盒盖大小相同，左盒盖的左端设有磁扣搭件，右盒盖的左端设有磁扣搭件；所述的固定海绵衬底置于盒体底部，海绵衬底上具有打好的管孔；所述的1个装有无核酸酶的超纯去离子水的1.5mL离心管、1个装有T790M检测引物及探针混合物的1.5mL离心管、1个装有L858R和L861Q检测引物及探针混合物的1.5mL离心管、1个装有19外显子缺失检测引物及探针混合物的1.5mL离心管、1个装有阳性质控物的1.5mL离心管、1个装有阴性质控物的1.5mL离心管、12个带独立管盖的八连管分别置于1个固定海绵衬底的管孔中。盒体B中所述光滑玻璃纸衬底为固定于盒体B的底部；所述的1个卡槽隔盒固定于盒体B的左侧，将盒体B分成两部分，隔盒上具有打好的卡槽，放置1张光盘；所述的光盘内存有数字PCR的校准文件；所述PCR芯片为具有1个独立透明硬塑料外壳包装，里面有3组数字PCR芯片及配件；所述3组数字PCR芯片的每个芯片底部分别贴有唯一的识别条形码。

进一步，所述盒体A中的固定海绵衬底，优选使用白色。