[发明专利]用于确定纤维蛋白原的方法

说明书

本发明涉及凝血诊断并涉及一种用于根据Clauss方法确定人体血浆样本的纤维蛋白原浓度的动力学方法。

技术领域

本发明涉及凝血诊断领域并且涉及一种用于根据Clauss方法确定人体血浆样本中的纤维蛋白原浓度的方法。

背景技术

纤维蛋白原是纤维蛋白的水溶性前身，纤维蛋白形成用于伤口愈合的基质。凝血蛋白酶Thrombin(因子IIa)使纤维蛋白原分裂并且以该方式激活纤维蛋白形成、即血块形成。降低的纤维蛋白原水平伴随着出血倾向。急剧升高的纤维蛋白原水平通常出现在发炎、术后或其它的情况中。长期升高的纤维蛋白原水平适合作为血栓疾病的风险指标。

在现有技术中已知了用于确定纤维蛋白原浓度的一系列不同方法。

在CA 1062501中描述了基于对凝血酶时间进行测量的纤维蛋白原确定方法，其中，凝血酶时间已知不能实现精确地确定纤维蛋白原浓度，因为除了纤维蛋白原之外还有另外的因素、例如抗凝血剂(如肝素)或直接的凝血酶抑制剂又或者存在能够影响凝血酶时间的纤维蛋白或纤维蛋白原分裂物，并且凝血酶时间通常仅在纤维蛋白原严重不足的状态下起作用。在凝血酶时间方法中，通常以较小的凝血酶数量混合未稀释的血浆样本，并且光度地测量纤维蛋白形成、即反应混合物的吸光变化并且随后确定凝血时间。然而，根据CA1062501不确定凝血时间，而是确定反应曲线的一阶导数的最大值，或者换句话说反应曲线的最大吸光变化。所发现的是，最大吸光变化与纤维蛋白原浓度呈线性相关，从而后者能够借助于校准曲线来确定，该校准曲线从已知的纤维蛋白原浓度与最大吸光变化的对应关系来建立。

用于确定纤维蛋白原浓度的基本上精确并且经常应用的方法是所谓的Clauss方法(Clauss，A.，用于确定纤维蛋白原的凝血生理学的快速方法。1957年，Actahaemat.17：237-246)。该测试是凝血酶时间的变体方案，其中血浆样本与凝血酶混合并且确定凝血时间。在Clauss方法中，在反应混合物中，较低的纤维蛋白原浓度与较高的标准化的凝血酶浓度组合，由此纤维蛋白形成速度在实际上仅与纤维蛋白原浓度相关。反应混合物中的相对较低的纤维蛋白原浓度通常通过应用事先稀释的血浆样本建立。

在反应混合物中随后光度地确定纤维蛋白形成、即血块形成。由于纤维蛋白形成使得反应混合物浊度增加，从而能够通过吸收测量定量地测量纤维蛋白形成。

随后，通常确定样本的凝血时间。样本的凝血时间与纤维蛋白原数量成比例。样本的凝血时间是从凝血酶加入样本的时间点到测量到可辨认的纤维蛋白形成、即反应混合物的浊度的时间点的时间。在此，“可辨认的纤维蛋白形成”能够限定为测试和设备专用的阈值，该阈值-当超过其的时候-表明了凝血时间。可替换地，从凝血反应开始之前与结束之后的信号差出发，“可辨认的纤维蛋白形成”能够限定为测试和设备专用的百分比信号差值，其-当超过其的时候-表明了凝血时间。Clauss测试中的纤维蛋白形成的反应动力学与凝血酶时间测试中的纤维蛋白形成的反应动力学明显不同。在Clauss测试中，在添加了凝血酶试剂之后3秒，已经开始了取决于纤维蛋白原浓度的纤维蛋白形成，即明显早于在凝血酶时间测试中最早在10秒后才实现的纤维蛋白形成。此外，在Clauss测试中，纤维蛋白形成速度至少在浓度比较高的样本中高于凝血酶时间测试的情况。因此，与凝血酶时间测试相比，Caluss测试中的具有高纤维蛋白原浓度的样本的反应曲线的特征在于较短的迟滞期、陡峭的上升和相对较快地到达稳定阶段。与凝血酶时间测试相比，Caluss测试中的具有低纤维蛋白原浓度的样本的反应曲线的特征在于同样较短的迟滞期、平缓的上升和主要在结束测量之后才迟迟进入的稳定阶段。相对而言，在凝血酶时间中，稳定阶段很不明显或者甚至完全没有。

问题在于，由于Caluss测试中的血浆样本的相对较高的稀释度而仅获得相对较低的信号强度，这种信号强度能够由于光学系统中较低的信噪比和已经由于轻微的干扰(例如反应混合物中的能够由于应用冷却的试剂产生的气泡)而导致不精确的测量结果。

为了避免该问题，在现有技术中应用未冷却的试剂，和/或添加陶土作为增强信号的附加试剂。