[发明专利]制备软骨细胞悬液的方法及其用途

说明书

一种用于制备软骨细胞悬液的方法及其在受试者膝或踝或肩或腕或肘或髋的缺损部位中的用途。

本发明涉及一种用于制备软骨细胞悬液的方法及其在受试者膝或踝或肩或腕或肘或髋的缺损部位中的用途。

发明背景

受试者膝或踝或肩或腕或肘或髋的软骨缺损是由于软骨退化/损伤引起的。关节软骨是由II型胶原蛋白网络(软骨细胞)组成的复杂活组织。软骨在骨骼的末端提供光滑的表面，从而允许关节内几乎无摩擦的运动。运动损伤、跌倒等创伤、直接打击或旋转力量或疾病如骨坏死(Osteonecrosis)或剥脱性骨软骨炎(Osteochondritis dissecans)可导致软骨损伤。

损伤的软骨可以用非侵入性或侵入性疗法来治疗。

非侵入性疗法包括休息、冷/热敷、非甾体抗炎药(NSAID)和关节内类固醇注射。

侵入性疗法包括

A.关节镜下灌洗和清创，其暂时缓解症状，并不会阻止进展。

B.骨髓刺激诸如磨削成形术钻孔和微骨折，其导致关节连接恢复，但由于含有I型胶原的不规则和紊乱的纤维软骨从长远来看产生不希望的结果。

C.接种在胶原膜移植物上的细胞、骨膜和软骨膜，鉴于再生软骨与原始软骨相比低质量的生物物理性质，其提供不希望的结果。

D.自体骨软骨移植(autologous osterochondral transplantation)。

Brittberg M等人，The New England Journal of Medicine(《新英格兰医学杂志》)，第331卷第14期，1994年10月6日教导了治疗年龄从14岁到48岁范围内具有大小在1.6cm²至6.5cm²范围内的全层软骨缺损的患者。然而，需要收获达到300mg至500mg的软骨切片，培养后细胞仅增加10倍。本发明的用于制备软骨细胞悬液的方法需要从膝收获约40mg至100mg软骨，并且培养能够使细胞数量增加300倍而不丧失活力和细胞特征。此外，待治疗的软骨缺损大小可以是1cm²至20cm²。

自体骨软骨移植被认为是一种可以完全生成软骨的方法，并于1997年被美国FDA批准。然而，它需要使用关节镜检查从膝的非负重区收获约200mg健康关节软骨，并将培养的细胞嵌入I/III型胶原蛋白膜上。本发明的用于制备软骨细胞悬液的方法需要从膝收获约40mg至100mg软骨。

Nam-Yong Chai等人，BMC Musculoskeletal Disorders(《BMC肌肉骨骼失调》)2010,11:103公开了不使用骨膜或膜的凝胶型自体软骨细胞植入。该方法基于将体外培养的自体软骨细胞与纤维蛋白胶混合移植到膝软骨缺损中。然而，它需要使用关节镜检查从膝的非负重区收获约200-300mg健康关节软骨。当将每个小瓶1200万个软骨细胞培养四至六周后进行植入。然而，本发明的用于制备软骨细胞悬液的方法需要从膝收获约40mg至100mg软骨，并且培养能够在四周内得到不少于4800万个细胞而不丧失活力和细胞特征。

欧洲专利号1181908B1(转让给M/s Verigen Transplantation ServiceInternational)公开了使用粘附在胶原蛋白支持物上的软骨细胞进行软骨修复。然而，本发明的方法将避免使用胶原蛋白支持物进行软骨修复。

PCT公开号2007/011094(申请人Sewon Cellontech Co.Ltd)公开了用于自体软骨细胞移植的可注射软骨细胞，其包括混合纤维蛋白、透明质酸和胶原蛋白。然而，本发明的方法将避免使用透明质酸和胶原蛋白进行自体软骨细胞移植。

发明目的