[发明专利]来自类球红细菌的突变体3-羟基丁酸脱氢酶及其相关方法和用途在审
申请号: | 201780004965.X | 申请日: | 2017-02-09 |
公开(公告)号: | CN108473966A | 公开(公告)日: | 2018-08-31 |
发明(设计)人: | D·贝克;M·博尼茨-拉特;P·克拉特扎克;T·圣里德;C·霍恩 | 申请(专利权)人: | 豪夫迈·罗氏有限公司 |
主分类号: | C12N9/04 | 分类号: | C12N9/04;C12Q1/32 |
代理公司: | 北京坤瑞律师事务所 11494 | 代理人: | 岑晓东 |
地址: | 瑞士*** | 国省代码: | 瑞士;CH |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 突变体 羟基丁酸脱氢酶 羟基丁酸 核酸 类球红细菌 性能改善 野生型 细胞 | ||
1.一种相对于野生型3-HBDH性能改善的来自类球红细菌(Rhodobacter sphaeroides)的突变体3-羟基丁酸脱氢酶(3-HBDH),其中该突变体包含与SEQ ID NO:1的氨基酸序列(来自类球红细菌的3-HBDH;野生型3-HBDH)至少80%同一的氨基酸序列且
其中该突变体相对于野生型3-HBDH具有与SEQ ID NO:1的位置250对应的位置处的至少一处氨基酸替代。
2.权利要求1的突变体3-HBDH,其中与SEQ ID NO:1的位置250对应的位置处的氨基酸用Met(250Met)或Ile(250Ile),特别是用Met(250Met)替代。
3.权利要求1或2的突变体3-HBDH,其中该突变体具有至少一处与SEQ ID NO:1的位置66,109 113,125,140,144,145,195,197,217,223,232,239和/或257,特别是至少SEQ IDNO:1的位置125,144和/或232,更加特别是至少SEQ ID NO:1的位置125和/或144对应的一个或多个位置处的别的氨基酸替代。
4.权利要求3的突变体3-HBDH,其中
-与SEQ ID NO:1的位置66对应的位置处的氨基酸用Tyr(66Tyr)或Asn(66Asn)替代;
-与SEQ ID NO:1的位置109对应的位置处的氨基酸用Glu(109Glu)替代;
-与SEQ ID NO:1的位置113对应的位置处的氨基酸用Thr(113Thr)替代;
-与SEQ ID NO:1的位置125对应的位置处的氨基酸用Phe(125Phe)替代;
-与SEQ ID NO:1的位置140对应的位置处的氨基酸用Val(140Val)替代;
-与SEQ ID NO:1的位置144对应的位置处的氨基酸用Arg(144Arg)替代;
-与SEQ ID NO:1的位置145对应的位置处的氨基酸用Gly(145Gly)替代;
-与SEQ ID NO:1的位置195对应的位置处的氨基酸用Gln(195Gln)或Leu(195Leu)替代;
-与SEQ ID NO:1的位置197对应的位置处的氨基酸用Ile(197Ile)替代;
-与SEQ ID NO:1的位置217对应的位置处的氨基酸用Val(217Val)替代;
-与SEQ ID NO:1的位置223对应的位置处的氨基酸用Val(223Val)替代;
-与SEQ ID NO:1的位置232对应的位置处的氨基酸用Cys(232Cys),Tyr(232Tyr),或Trp(232Trp),尤其是232Cys替代;
-与SEQ ID NO:1的位置239对应的位置处的氨基酸用Tyr(239Tyr)或Trp(239Trp)替代;
-与SEQ ID NO:1的位置250对应的位置处的氨基酸用Met(250Met)替代;和/或
-与SEQ ID NO:1的位置257对应的位置处的氨基酸用Met(257Met)或Gln(257Gln)替代。
5.权利要求4的突变体,其中
-与SEQ ID NO:1的位置37对应的位置处的氨基酸用Tyr(37Tyr)替代;
-与SEQ ID NO:1的位置202对应的位置处的氨基酸用Gly(202Gly)替代,和/或
-与SEQ ID NO:1的位置230对应的位置处的氨基酸用Leu(230Leu)替代;
特别是与250Met组合。
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