[发明专利]具有改变的多样性支架结构域的结合成员

权利要求书

1.一种筛选方法，其包括：

(i)提供结合成员的创始文库，

所述文库中的每个结合成员包含融合蛋白且任选地包含与所述融合蛋白关联的配偶体结构域，

其中所述融合蛋白包含插入受体多样性支架结构域内的供体多样性支架结构域，任选地其中所述供体多样性支架结构域的N和C末端连接至具有至多4个氨基酸的连接子的所述受体多样性支架结构域，

其中所述供体多样性支架结构域包含供体支架和供体相互作用序列，且所述受体多样性支架结构域包含受体支架和受体相互作用序列，并且在所述创始文库中所述供体相互作用序列、受体相互作用序列和连接子中的一者、两者或全部三者不同，

(ii)针对显示结合活性的结合成员来筛选所述创始文库，以及

(iii)对显示所述结合活性的、所述创始文库中的一种或多种结合成员进行鉴定。

2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述创始文库中的所述结合成员具有不同的供体相互作用序列和相同的受体相互作用序列。

3.根据权利要求1所述的方法，其中，所述创始文库中的所述结合成员具有不同的受体相互作用序列和相同的供体相互作用序列。

4.根据权利要求1所述的方法，其中，所述创始文库中的所述结合成员具有不同的受体和供体相互作用序列。

5.根据权利要求1至4中任一项所述的方法，其中，所述创始文库中的所述结合成员具有不同的连接子序列。

6.根据权利要求5所述的方法，其中，所述创始文库中的所述结合成员具有相同的受体和供体相互作用序列。

7.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其包括通过以下进一步富集所述一种或多种结合成员：

(a)回收所述一种或多种结合成员，

(b)对所述回收的结合成员针对所述结合活性进行选择，

(c)回收所述一个或多个选择的结合成员，

(d)任选地重复步骤(b)和(c)一次或多次。

8.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其还包括：

(iv)在一种或多种鉴定的创始结合成员的氨基酸序列中的一个或多个位置处引入不同的氨基酸残基以产生修饰的结合成员文库，

(v)针对显示结合活性的修饰的结合成员来筛选所述修饰的文库，以及(vi)对显示所述结合活性的、所述修饰的文库中的一种或多种修饰的结合成员进行鉴定。

9.根据权利要求1至8中任一项所述的方法，其中，通过随机诱变或定点诱变引入所述不同的氨基酸。

10.根据权利要求8或权利要求9所述的方法，其中，所述一个或多个位置在所述一种或多种鉴定的结合成员的所述供体支架、供体相互作用序列、受体支架、受体相互作用序列、连接子或配偶体结构域的氨基酸序列内。

11.根据权利要求8至10中任一项所述的方法，其中，相对于步骤(iii)中鉴定的所述一种或多种结合成员，一种或多种所述修饰的结合成员的所述结合活性改善。

12.根据权利要求8至11中任一项所述的方法，其包括通过以下进一步富集所述一种或多种结合成员：

(e)回收所述一种或多种修饰的结合成员，

(f)对所述回收的修饰的结合成员针对所述结合活性进行选择，

(g)回收所述一个或多个选择的结合修饰的成员，以及

(h)任选地重复步骤(f)和(g)一次或多次。

13.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其包括用替代的供体多样性支架结构域置换所述一种或多种鉴定的结合成员或修饰的结合成员中的所述供体多样性骨架结构域。