[发明专利]使用感染原快速检测微生物的方法和系统

权利要求书

1.一种重组噬菌体，其包含插入噬菌体CBA120基因组的晚期基因区的指示基因。

2.权利要求1的重组噬菌体，其中所述重组噬菌体特异性地感染大肠杆菌O157:H7。

3.权利要求1的重组噬菌体，其中所述指示基因是密码子优化的并且编码产生固有信号的可溶性蛋白质产物或在与底物反应时产生信号的可溶性酶。

4.权利要求3的重组噬菌体，其进一步包含位于密码子优化的指示基因上游的非翻译区，其中非翻译区包含噬菌体晚期基因启动子和核糖体进入位点。

5.一种制备重组指示噬菌体的方法，包括：

选择特异性感染靶病原菌的野生型噬菌体；

制备包含指示基因的同源重组质粒/载体；

将同源重组质粒/载体转化至靶病原菌；

用选择的野生型噬菌体感染经转化的靶病原菌，从而允许质粒/载体和噬菌体基因组之间发生同源重组；和

分离重组噬菌体的特定克隆。

6.权利要求5的方法，其中制备同源重组质粒/载体包括：

确定所选噬菌体的基因组晚期区中的天然核苷酸序列；

注释基因组并鉴定所选噬菌体的主要衣壳蛋白基因；

设计用于主要衣壳蛋白基因下游的同源重组的序列，其中该序列包含密码子优化的指示基因；和

将设计用于同源重组的序列掺入质粒/载体中。

7.权利要求6的方法，其中设计序列还包括在密码子优化的指示基因的上游插入包含噬菌体晚期基因启动子和核糖体进入位点的非翻译区。

8.权利要求5的方法，其中同源重组质粒包含位于密码子优化的指示基因上游的非翻译区，其包含噬菌体晚期基因启动子和核糖体进入位点。

9.权利要求5的方法，其中野生型噬菌体是CBA120，靶病原菌是大肠杆菌O157:H7。

10.权利要求5的方法，其中分离重组噬菌体的特定克隆包括用于分离证明指示基因的表达的克隆的有限稀释测定。

11.一种检测样品中大肠杆菌O157:H7的方法，包括：

用衍生自CBA120的重组噬菌体孵育样品，和

检测由重组噬菌体产生的指示蛋白产物，其中指示蛋白产物的阳性检测表明样品中存在大肠杆菌O157:H7。

12.权利要求11的方法，其中所述样品是食品、环境、水、商业或临床样品。

13.权利要求11的方法，其中所述方法检测用于食品安全工业的标准尺寸的样品中的少至10、9、8、7、6、5、4、3、2或单个的细菌。

14.权利要求12的方法，其中所述样品包括牛肉或蔬菜。

15.权利要求11的方法，其中所述样品首先在有利于富集生长的条件下孵育，所述富集生长的时间为9小时或更短，8小时或更短，7小时或更短，6小时或更短，5小时或更短，4小时或更短，3小时或更短，或2小时或更短。

16.权利要求11的方法，其中获得结果的总时间小于12小时，小于11小时，小于10小时，小于9小时，小于8小时，小于7小时或小于6小时。

17.权利要求11的方法，其中通过检测指示剂产生的信号与背景的比率为至少2.0或至少2.5。

18.一种用于检测大肠杆菌O157:H7的试剂盒，其包含衍生自CBA120的重组噬菌体。