[发明专利]脂肪组织衍生的间充质基质细胞条件培养基及其制备和使用方法

说明书

本文提供了包含培养的脂肪细胞的分泌蛋白质组的冻干组合物、还包含缓释递药基质的药物组合物以及制备和使用这类组合物的方法。

相关申请

本申请要求2016年2月12日提交的美国临时申请号62/294,489和2016年10月28日提交的美国临时申请号62/414,285的优先权，其通过引用各自完整地并入本文。

技术领域

本发明一般性涉及包含来源于条件培养基的干细胞的分泌物的组合物以及制备和使用它们的方法。

背景技术

再生医学是涉及人体细胞、组织或器官的替代或再生以便恢复或建立正常功能的医学领域。例如，干细胞疗法可以用于治疗、预防或治愈各种疾病和障碍。

干细胞是具有无限分裂能力的细胞，并且在某些特定条件下，可以分化成多种不同的细胞类型。全能(topipotent)干细胞是这样的干细胞，其有可能产生构成胚胎的所有细胞和组织。多能(pluripotent)干细胞是产生中胚层、内胚层和外胚层细胞的干细胞。多能(multipotent)干细胞是具有分化成两种或多种细胞类型的能力的干细胞，而单能干细胞是仅分化成一种细胞类型的干细胞。

然而，以临床相关的规模生产和储存干细胞的疗法是困难的。(参见Trainor等人,Nature Biotechnology 32(1)(2014)。此外，这类疗法的治疗效能和再生能力通常是可变的且在移植之前或期间细胞可能死亡。(参见Newell,Seminars in Immunopathology 33(2):91(2011))。植入的干细胞也易受宿主免疫系统攻击，并且通常难以评估效力和/或控制“施用剂量”。因此，本领域需要额外的再生疗法，其可以克服目前与基于细胞的再生医学疗法相关的成本、储存和制造质量控制限制。

此外，眼部疗法领域也存在未能满足的巨大需求，这些疗法可以靶向眼后部，并且可以将治疗有效负荷长期递送至难以到达的视网膜内的感觉组织，其已经因创伤继发性炎症、急性炎症、衰老和/或氧化性应激导致变性。

发明内容

继发于急性或慢性代谢疾病的炎症的视网膜神经保护仍然是患有眼后部疾病的患者的未满足医疗需求的主要领域，并且目前使用抗VEGF疗法的目前的护理标准尚未实现。免疫细胞(包括视网膜小胶质细胞)的激活是退行性视网膜疾病的常见特征，包括糖尿病视网膜病变和干性AMD，并且可能导致慢性神经炎症和神经退行性过程的起始和传播，导致神经胶质增生，出血，地图样萎缩，视网膜色素上皮细胞(RPE)破裂和血管渗漏，从而导致视觉功能丧失。(参见Madeira等人,Mediators of Inflammation 2015:673090(2015))。

脂肪基质细胞(ASC或ADSC)通过旁分泌信号传导阻止细胞凋亡，并且通过经分泌可溶性和膜结合趋化因子、细胞因子、生长因子、血管生成因子和miRNA减少小神经胶质细胞激活和t-细胞增殖来防止胶质细胞瘢痕形成和内皮细胞紧密连接变性。(参见Cai等人,Stem Cells 25(12):3234-3243(2007))。

虽然间充质干细胞(MSC)的免疫调节的主要机制之一是T细胞和NK细胞的调节，但最近MSC也已显示将巨噬细胞从经典的促炎性M1表型极化为抗炎M2表型。(参见Kim等人,Exp Hematol 37(12):1445-1453(2009)。

收集和处理由细胞释放的旁分泌信号传导的ASC分泌物提供了开发具有成本效益、贮存稳定和无细胞再生疗法的可能性，其代表了直接ASC移植的吸引人的治疗替代方案。

本文提供了加工的冻干脂肪基质细胞分泌物的组合物，其为贮存稳定的易于重构和玻璃体内注射用于眼科用途。已经在动物研究中测试了这些组合物，并概括了递送至视网膜的ASC的再生神经血管保护作用。