[发明专利]老年CAR-T细胞及其用途

说明书

表达T细胞的嵌合抗原受体(CAR)是有前景的实体肿瘤免疫疗法形式。来自老年供体的CAR‑T细胞(gCART)在本文中显示相对于来自年轻供体的CAR‑T(yCAR‑T)功能受损。与gCAR‑T相比，在yCAR‑T细胞中观察到更高的转导效率和改善的细胞扩增。yCAR‑T显示pERK、pAKT、pSTAT3和pSTAT5的增殖和信号传导激活水平显著增加。此外，yCAR‑T含有较高比例的CD4和CD8效应记忆细胞(EM)，已知它们具有增强的细胞溶解能力。根据CD4和CD8EM的数量较高，与gCAR‑T相比，yCAR‑T表现出更高水平的CEA特异性细胞毒性，其中在IL15处理的yCAR‑T细胞中观察到最大细胞毒性。

技术领域

本文描述的主题涉及用于提高用重组病毒转导离体外周血单核细胞(PBMC)的效率的方法，所述重组病毒含有编码嵌合抗原受体(CAR)构建体的重组DNA分子。可以从患有如癌症的疾病的老年受试者收获PBMC，用感兴趣的CAR转导并将其返回给予受试者以治疗疾病。

背景技术

癌症是老年人的疾病，工业化国家的中位年龄为70岁(Gloeckler等人,2003,Oncologist,8:541-552)。老年人积累了更多与环境致癌物相关的遗传损伤，并且免疫功能降低或具有“免疫衰老”(Gloeckler等人,2003,Oncologist,8:541-552)。免疫衰老的特征在于初始T细胞区室的收缩和CD4+和CD8+T细胞功能缺陷，其损害抗肿瘤免疫力(Naylor等人,2005,J Immunol,174:7446-7452)。因此，癌症免疫疗法必须考虑与年龄相关的免疫变化。

主要通过开发CAR-T细胞平台，在过继性T细胞疗法(ACT)领域取得了重大进展。可以通过遗传工程改造自体T细胞以通过引入编码合成嵌合抗原受体(CAR)的基因来表达赋予肿瘤抗原精确特异性的蛋白质。在最近的I期HITM试验和正在进行的HITM-SIR Ib期研究中，我们测试了正在测试癌胚抗原(CEA)特异性CAR-T细胞的安全性。CEA在几种类型的癌症中表达，包括但不限于结肠直肠癌、乳腺癌、前列腺癌和肺癌。输注具有肿瘤抗原特异性的CAR-T细胞为患者提供即时的高度特异性免疫应答，与试图在宿主内产生免疫力的疫苗形成对比。

在老年患者中，存在从初始到记忆效应T细胞群的主要表型转变，其可使ACT不如治疗年轻患者有效(Kovaiou等人,2005,Int Immunol 17:1359-1366)。已知白细胞介素-2(IL2)和白细胞介素-15(IL15)通过共同的γ链(γc)和IL2β链受体发出信号，并且是T细胞增殖和分化的关键但功能上不同的调节剂。已知IL2和IL15都激活Jak/Stat、PI3k/Akt和Mek/Erk信号传导途径(Marzec等人,2008,Cancer Res,68:1083-1091)，但它们具有不同的免疫治疗效果。IL15对产生记忆和效应T细胞具有优异的作用，因此使用外源IL15代替IL2进行免疫治疗存在增长的趋势(Waldmann,2006,Nat Rev Immunol,6:595-601)。

研究了从老年供体产生的CAR-T细胞的抗肿瘤活性，并且进行了实验以评估IL2和IL15是否对老年和年轻供体中的CAR-T表型具有任何差异效应。本公开中提供的结果显示，与来自年轻供体的细胞相比，从老年供体获得的T细胞以较低的效率被转导，导致老年T细胞的细胞毒性和肿瘤杀伤活性较低。然而，如本公开所示，通过用增加α5β1表达的药剂处理收获的细胞，可以增加老年T细胞的转导效率。相关技术的前述实例和与其相关的限制旨在是说明性的而非排它性的。在阅读本说明书和研究附图之后，相关领域的其它限制对于本领域技术人员将变得显而易见。

发明内容

以下描述和说明的以下方面和实施例旨在是示例性和说明性的，而不是限制范围。