[发明专利]具有突变型犬尿氨酸酶基因的非人动物

说明书

本发明提供了非人动物、其制备和使用方法以及组合物，其中所述非人动物包含突变型L‑犬尿氨酸水解酶(或犬尿氨酸酶)基因。在一些实施方案中，所述非人动物可以被描述为具有内源性犬尿氨酸酶基因中的遗传修饰，以使所述非人动物表达包括氨基酸置换的犬尿氨酸酶多肽，所述氨基酸置换导致存在于人类免疫缺陷病毒‑1 gp41的近膜端外部区中的所述犬尿氨酸酶多肽中的表位消除。

相关专利申请的交叉引用

本专利申请要求2016年2月16日提交的美国临时专利申请No.62/295,524的优先权，该临时专利申请的公开内容全文以引用方式并入本文。

技术领域

包含突变型L-犬尿氨酸水解酶(或犬尿氨酸酶)基因的非人动物。表达突变型L-犬尿氨酸水解酶蛋白的非人动物。制备和使用包含突变型L-犬尿氨酸水解酶核酸序列的非人动物的方法。

背景技术

根据世界卫生组织(WHO)的报告，人类免疫缺陷病毒(HIV)是重大全球性健康问题，已夺去超过3400万人的生命。特别是，2014年全球HIV相关的死亡估计为98万至160万。HIV感染免疫系统的关键细胞；具体地讲，CD4⁺T细胞，并且随着时间的推移削弱宿主对许多感染和癌症的防御，从而导致称为获得性免疫缺陷综合征(AIDS)的病症。尽管开发了许多已显示出有望控制HIV感染和预防进一步传播的抗病毒治疗，但仍未治愈。最近的研究显示，HIV涉及到通过免疫耐受性来逃避宿主免疫监视，从而削弱中和与自体抗原类似的HIV表位的免疫应答(例如，抗体应答)。

发明内容

本发明涵盖以下认知：希望对非人动物进行工程化改造，以允许使用改进的体内系统鉴定和开发可用于治疗和/或预防HIV感染和/或传播的新疗法以及在一些实施方案中治疗方案。在一些实施方案中，本文所述的体内系统可用于鉴定和开发用于治疗高血压和/或肾脏疾病的新疗法。所提供的非人动物包含犬尿氨酸酶(Kynu)基因的断裂和/或以其他方式功能沉默的Kynu基因以使得不表达或不产生宿主Kynu多肽，并且例如对用于鉴定和开发靶向HIV(例如，HIV感染、传播、复制和/或HIV血清水平)的疗法而言是理想的。还提供了这样的非人动物：其包含突变型Kynu基因，以使得变体Kynu多肽由所述突变型Kynu基因表达或产生，并且例如对用于鉴定和开发靶向HIV(例如，HIV感染、传播、复制和/或HIV血清水平)的疗法而言是理想的。在一些实施方案中，本文所述的非人动物提供用于HIV相关的疾病、病状和病症的改进的体内系统(或模型)。在一些实施方案中，本文所述的非人动物提供用于高血压疾病、病状和病症的改进的体内系统(或模型)。

本发明提供用于产生结合外源抗原(例如，病原体)与自体抗原之间共有的表位的抗体的方法。具体地讲，本发明提供用于产生结合外源抗原和自体抗原的共有表位的抗体或其片段的方法，所述方法包括以下步骤：用含有外源抗原和自体抗原共有的或存在于它们之上的(或者与它们基本上相同的或相同的)表位的抗原免疫非人动物，在足以使非人动物对外源抗原和自体抗原共有的或存在于它们之上的表位产生免疫应答的条件下维持非人动物，以及从非人动物或非人动物细胞回收结合外源抗原和自体抗原共有的或存在于它们之上的表位的抗体，其中所述非人动物具有包含基因中的断裂或突变的基因组，所述断裂或突变导致从自体抗原中消除与外源抗原(该外源抗原不是自体抗原的同源物)共有的、存在于其上的或出现于其中的表位。在多个实施方案中，外源抗原是病毒(例如，HIV)。在多个实施方案中，用于产生本文所述的抗体的方法还包括从免疫化非人动物(或非人细胞)获得遗传物质，以及产生结合来自遗传物质的共有表位的抗体或其片段。

在一些实施方案中，断裂为或包括基因的全部或部分纯合子缺失，所述缺失消除基因产物(例如，mRNA或多肽)的表达。在一些实施方案中，突变为或包括基因中的一个或多个点突变，所述点突变消除外源抗原共有的或存在于其中的(或者与其基本上相同的或相同的)基因产物中的表位的表达，所述外源抗原诸如为病原体(例如，病毒、细菌、朊病毒、真菌、类病毒或寄生虫)。