[发明专利]在SSF方法中组合使用至少一种内切蛋白酶和至少一种外切蛋白酶以改善乙醇产量

权利要求书

1.一种用于从含淀粉材料产生发酵产物的方法，所述方法包括：

a)使用产碳水化合物源的酶在低于所述含淀粉材料的初始糊化温度的温度使所述含淀粉材料糖化；以及

b)使用发酵生物进行发酵；

其中步骤a)和/或b)在内切蛋白酶和外切蛋白酶混合物存在下进行，并且其中所述外切蛋白酶以总蛋白酶酶蛋白为基础构成所述蛋白酶混合物的至少5％(w/w)。

2.一种用于从含淀粉材料产生发酵产物的方法，所述方法包括以下步骤：

(a)在高于所述含淀粉材料的初始糊化温度的温度，在α-淀粉酶存在下，液化所述含淀粉材料；

(b)使用产碳水化合物源的酶来使步骤(a)中获得的液化材料糖化；

(c)使用发酵生物进行发酵；

其中步骤b)和/或c)在内切蛋白酶和外切蛋白酶混合物存在下进行，并且其中所述外切蛋白酶以总蛋白酶酶蛋白为基础构成所述蛋白酶混合物的至少5％(w/w)。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其中糖化和发酵同时进行。

4.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述外切蛋白酶以总蛋白酶酶蛋白为基础构成所述蛋白酶混合物的至少10％(w/w)，例如至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、特别地至少75％、更特别地所述外切蛋白酶以总蛋白酶酶蛋白为基础构成组合物中所述蛋白酶混合物的从5％至95％(w/w)、特别地10％至80％(w/w)、特别地15％至70％(w/w)、更特别地20％至60％(w/w)、以及甚至更特别地25％至50％(w/w)。

5.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述内切蛋白酶和外切蛋白酶以5:2微克酶蛋白(EP)/g干固体(DS)的比例存在，特别地是5:3，更特别地是5:4。

6.根据权利要求1-5中任一项所述的方法，其中所述内切蛋白酶源自属于S53、S8、M35、A1家族的蛋白酶。

7.根据权利要求1-5中任一项所述的方法，其中所述外切蛋白酶源自属于S10、S53、M14、M28家族的蛋白酶。

8.如权利要求6所述的方法，其中所述S53蛋白酶源自亚灰树花菌属的菌株，更特别地大型亚灰树花菌。

9.如权利要求6所述的方法，其中所述S8蛋白酶源自火球菌属、高温球菌属的菌株，特别地强烈火球菌和嗜热高温球菌。

10.根据权利要求7所述的方法，其中所述S53外切蛋白酶来源于曲霉属、木霉属、嗜热子囊菌属或嗜热真菌属的菌株，特别是米曲霉、黑曲霉、里氏木霉、嗜热嗜热子囊菌或疏棉状嗜热丝孢菌。

11.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中在糖化和/或发酵过程中存在和/或添加α-淀粉酶。

12.根据权利要求11所述的方法，其中所述α-淀粉酶是酸性α-淀粉酶，优选地是酸性真菌α-淀粉酶。

13.根据权利要求12所述的方法，其中所述α-淀粉酶是源自曲霉属，特别是土曲霉、黑曲霉、米曲霉、泡盛曲霉、或白曲霉的菌株；或者源自根毛霉属，优选是微小根毛霉的菌株；或者源自亚灰树花菌属，优选是大型亚灰树花菌的菌株。

14.如权利要求11-13中任一项所述的方法，其中所述α-淀粉酶以0.001至10AFAU/gDS，优选地0.01至5AFAU/g DS，特别地0.3至2AFAU/g DS或0.001至1FAU-F/g DS，优选地0.01至1FAU-F/g DS的量存在。