[发明专利]用于治疗哺乳动物内骨关节炎和相关关节病症的表达骨保护性基因、包括HAS2和润滑素的重组AAV载体

权利要求书

1.一种包含rAAV载体的重组腺相关病毒(rAAV)，其中所述rAAV载体包含与启动子可操作连接的编码犬HAS2多肽的核酸序列。

2.权利要求1的rAAV，其中所述编码HAS2多肽的核酸序列与SEQ ID NO:3中所示的序列具有至少90％同一性，或者所述核酸编码包含与SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列具有至少90％同一性的氨基酸序列的HAS2多肽，或者其中所述HAS2多肽包含SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列；和/或所述重组质粒包含pCBA-HI-cHAS2-BGHpA。

3.一种包含rAAV载体的rAAV，其中所述rAAV载体包含与启动子可操作连接的编码缩短的犬润滑素的核酸序列。

4.权利要求3的rAAV，其中所述编码润滑素的核酸序列与SEQ ID NO:6中所示的核苷酸序列具有至少90％同一性，或者所述核酸编码包含与SEQ ID NO:7中所示的氨基酸序列具有至少90％同一性的氨基酸序列的润滑素。

5.权利要求3或4的rAAV，其中所述润滑素多肽具有SEQ ID NO:7中所示的氨基酸序列。

6.权利要求3至5中任一项的rAAV，其中所述rAAV载体包含SEQ ID NO:8中所示的核苷酸序列。

7.权利要求1至6中任一项的rAAV，其中所述启动子选自CMV IE启动子、RSV启动子、HSV-1TK启动子、SV40早期启动子、SV40晚期启动子、磷酸甘油酸激酶基因启动子、金属硫蛋白基因启动子、α-1抗胰蛋白酶基因启动子、白蛋白基因启动子、胶原酶基因启动子、弹性蛋白酶I基因启动子、CBA启动子、β-肌动蛋白基因启动子、β-珠蛋白基因启动子、γ-珠蛋白基因启动子、甲胎蛋白基因启动子和肌肉肌酸激酶基因启动子。

8.权利要求1至7中任一项的rAAV，其中所述rAAV包含AAV2衣壳或AAV5衣壳。

9.权利要求8的rAAV，其中所述rAAV包含AAV5衣壳。

10.一种药物组合物，其包含权利要求1至9中任一项的rAAV和任选地至少一种药学上或兽医学上可接受的载体、赋形剂或媒介物。

11.一种治疗患有骨关节炎(OA)的哺乳动物受试者的方法，其包括向所述哺乳动物受试者关节内施用治疗有效量的重组腺相关病毒(rAAV)，所述重组腺相关病毒包含与启动子可操作地连接的编码骨保护性或骨再生多肽的核酸，其中所述多肽在所述哺乳动物受试者中以有效减轻OA症状的量体内表达；

其中所述多肽是透明质酸合酶(HAS)、润滑素、白细胞介素-1受体(IL-1R)拮抗剂、胰岛素样生长因子1(IGF-1)、成纤维细胞生长因子2(FGF-2)、转化生长因子β1(TGFβ1)、骨形态发生蛋白7(BMP7)、葡萄糖胺-果糖-6-磷酸氨基转移酶(GFAT)、白细胞介素10(IL-10)、血红素加氧酶-1HO-1、其生物活性截短或其组合。

12.权利要求11的方法，其中所述多肽是HAS2多肽。

13.权利要求11或12的方法，其中所述HAS2多肽包含与SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列具有至少90％同一性的氨基酸序列或在所述受试者中在体内表现出HAS2活性的其片段、变体或同系物。

14.权利要求11-13中任一项的方法，其中所述HAS2多肽包含SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列。

15.权利要求11-14中任一项的方法，其中所述编码HAS2多肽的核酸具有与SEQ ID NO:3中所示的核苷酸序列具有至少90％同一性的核苷酸序列；以及

其中所述rAAV包含rAAV载体基因组，其从5'至3'包含以下元件：5'AAV反向末端重复序列(ITR)、填充核酸、启动子、内含子(IN)、cHAS2密码子优化的cDNA、多聚腺苷酸化信号(pA)和3'AAV ITR。