[发明专利]用于从生物样品中提取核酸的方法

说明书

本发明涉及用于从生物样品中提取核酸的方法，其中所述提取方法提供了用于有效地提取核酸的新方法。当从常规生物样品中提取核酸时，因为存在于生物样品中的多种杂质未被适当地除去，因此纯化率低。然而，根据本发明，提供了用于从生物样品中提取核酸的方法，其中通过在生物样品破碎步骤和纯化步骤中添加表面活性剂和硫酸钠(Na₂SO₄)溶液而提高了细菌和核酸的回收率，从而使得能够以更大的灵敏度和准确度检测病原体。

技术领域

本发明涉及用于从生物样品中提取核酸的方法，并且更具体地，涉及用于提取核酸的方法，其通过使用生物样品的与现有的用于提取核酸的商业方法不同的方法，通过有效地从复杂环境和生物样品中除去杂质提高了核酸回收率。

背景技术

最近，已经开发了多种灵敏且准确地检测病原体的方法，例如选择性培养基方法、使用特异性抗体或抗原的特异性反应方法、或核酸扩增方法。通过使用几种生物或化学材料(例如纳米颗粒、酶、化学发光试剂或脂质体)引入检测信号的放大，已经快速发展了上述方法的检测限，并且在它们当中，有几种方法已经被商业化。

然而，由于样品预处理过程(浓缩和纯化)持续需要长的时间段，因此信号放大方法的开发和检测时间的缩短仍然是样品中病原体检测方法中的重要开发任务。

由于样品的组分复杂，因此难以在没有预处理过程的情况下进行生物检测方法，例如使用抗体或酶促反应的测定，此外，难以将浓缩过程应用于不能培养的目标，例如诺如病毒。

饮用水和简单的食物样品例如水果和蔬菜中固有的病原体的物理、化学或生物浓缩方法已经得到了不同的开发，例如离心法、使用聚乙二醇(PEG)的沉积法、使用带电过滤器的浓缩法、通过使用NaCl增加离子强度的吸附法、使用二价阳离子(Ca²⁺和Mg²⁺)的浓缩法、以及使用抗体的分离方法。

然而，为了在现场快速且有成效地检测细菌或病毒，仍存在缩短预处理时间和提高在低浓度下的检测效率两个重要问题。因此，从科学或商业角度来看，一直需要简单地浓缩和破坏病原体的方法。

当生物样品是粪便时，作为现有的商业化方法，在分离粪便样品的过程期间经常使用用于使粪便沉淀并从粪便中分离核酸的方法。例如，MoBio Laboratories Inc.(Carlsbad，美国)提出了一种通过使用三价阳离子(例如铝)使杂质絮凝的方法，并且通过使用Boom技术(Boomtechnology)浓缩/纯化DNA的一个重要特征在于通过使用Al³⁺和NH₄³⁺等来使杂质沉淀的方法，该方法对于复杂样品(例如粪便或土壤)非常有效并且在现有的技术中显示出最高的效率，但其回收率仅小于1％。Qiagen，Inc.(Hilden，德国)提出了一种通过使用基于碳水化合物的吸附基质来吸附和除去抑制聚合酶链式反应(PCR)之材料的方法，但该方法对于纯化复杂样品(例如粪便样品)非常有效，但其回收率小于0.1％。此外，ZymoResearch Corp.(Irvine，美国)提出了一种通过使用500μm珠施加物理力来提取存在于粪便中的核酸的方法，但是由于未能除去存在于粪便样品中的多种杂质，因此存在其纯化率低的限制。

因此，需要开发一种能够通过除去存在于复杂样品(例如粪便)中的多种杂质来提高核酸提取率的方法。

发明内容

技术问题

本发明提供了一种用于从生物样品中提取核酸的方法，所述方法能够通过使用表面活性剂和亲液盐(kosmotropic salt)来提高细菌和核酸的回收率，以有效地从生物样品中提取核酸。

技术方案