[发明专利]α淀粉酶变体及其应用

权利要求书

1.α淀粉酶变体，其特征在于所述的α淀粉酶变体为以下(1)和(2)的结合，或者为以下(1)、(2)和(3)的结合：

(1)由G.stearothermophilus的亲代α淀粉酶缺失其N-末端第1个至第5个氨基酸残基并替换成VN或ANLN得到；

(2)由G.stearothermophilus亲代α淀粉酶缺失其C-末端27个至32个氨基酸残基得到；

(3)由G.stearothermophilus亲代α淀粉酶缺失其N-末端第180个和第181个氨基酸残基而获得；

其中所述的亲代α淀粉酶为G.stearothermophilus的α淀粉酶，其氨基酸序列见SEQ IDNO.2。

2.根据权利要求1所述的α淀粉酶变体，其特征在于所述的α淀粉酶变体的C-末端增加FAN三个氨基酸残基。

3.根据权利要求1或2所述的α淀粉酶变体，其特征在于所述的α淀粉酶变体的氨基酸序列选自以下任意一种：SEQ ID NO.4，SEQ ID NO.6，SEQ ID NO.8，SEQ ID NO.10和SEQ IDNO.12。

4.根据权利要求3所述的α淀粉酶变体，其特征在于所述的α淀粉酶变体的核苷酸编码序列选自以下任意一种：SEQ ID NO.3，SEQ ID NO.5，SEQ ID NO.7，SEQ ID NO.9和SEQ IDNO.11。

5.编码权利要求1～4任一项所述的α淀粉酶变体的基因。

6.根据权利要求5所述的基因，其特征在于选自SEQ ID NO.3，SEQ ID NO.5，SEQ IDNO.7，SEQ ID NO.9和SEQ ID NO.11中的任意一种。

7.用于表达权利要求1～6任一项所述的α淀粉酶变体的表达载体，其特征在于含有权利要求9或10所述的编码α淀粉酶变体的基因。

8.根据权利要求7所述的表达载体，其特征在于所述的表达载体包括主要由一个天然或者合成的启动子序列，一个天然或合成的核糖体结合位点，一个天然或合成的终止子序列，以及权利要求5或6所述的编码α淀粉酶变体的基因序列一同组成了一个表达组件。

9.一种用于表达权利要求1～4任一项所述的α淀粉酶变体的重组细胞，其特征在于包含权利要求5或6所述的编码α淀粉酶变体的基因或权利要求7或8所述的表达载体。

10.根据权利要求9所述的重组细胞，其特征在于重组细胞的宿主细胞选自Bacillus菌株,优选B.licheniformis或经过基因工程改造失活了一些内源性蛋白的Bacillus菌株。

11.根据权利要求10所述的重组细胞，其特征在于重组细胞的宿主细胞选自经过基因工程改造失活了AprE和/或NprE的B.licheniformis。

12.一种权利要求1～4任一项所述的α淀粉酶变体的生产方法，其特征在于包括在适宜α淀粉酶变体表达的条件下对含有编码α淀粉酶变体基因序列的重组细胞进行培养，并从重组细胞或者其培养上清液中获得α淀粉酶变体。

13.权利要求1～4任一项所述的α淀粉酶变体在水解多糖的α-1,4糖苷键中的应用。

14.根据权利要求13所述的应用，其特征在于所述的α淀粉酶变体在高温和/或低pH条件下水解多糖的α-1,4糖苷键中的应用；所述的高温选自80℃～110℃；所述的低pH为5.0～5.5。