[发明专利]外切核酸酶缺陷的聚合酶有效
| 申请号： | 201780013854.5 | 申请日： | 2017-02-27 |
| 公开（公告）号： | CN108699539B | 公开（公告）日： | 2022-11-18 |
| 发明（设计）人： | A.阿耶;A.比比洛;D.达拉尔;P.萨瓦鲍曼;I.莱德曼;E.泰 | 申请（专利权）人： | 吉尼亚科技公司 |
| 主分类号： | C12N9/12 | 分类号： | C12N9/12 |
| 代理公司： | 中国专利代理(香港)有限公司 72001 | 代理人： | 权陆军;黄希贵 |
| 地址： | 美国加利*** | 国省代码： | 暂无信息 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 外切 核酸酶 缺陷 聚合 | ||
1.具有DNA聚合酶活性的衍生自亲本DNA聚合酶多肽的修饰的DNA聚合酶，其包含与SEQID NO:1中所示的氨基酸序列具有至少80％序列同一性的氨基酸序列，其在对应于位置T45、H123、L125、W127、D128、V179、S211、Y212、I215、T216、E219、Q221、E239、D241、Y242、Y259、Q260、A292、S293和S294的位置处包含取代，其中所述修饰的聚合酶是外切核酸酶缺陷的。
2.根据权利要求1所述的修饰的DNA聚合酶，其中所述修饰的聚合酶保留链置换能力。
3.根据权利要求1所述的修饰的DNA聚合酶，其中所述修饰的聚合酶具有选自L125K、D128H、V179Y、V179R、S211F、Y212K、I215L、T216K、Q221R、Y242G/A/L/S、Y259G/K/Q、A292K、S293G和S294T的取代。
4.根据权利要求1所述的修饰的DNA聚合酶，其中所述修饰的聚合酶与SEQ ID NO:1具有至少90％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性。
5.根据权利要求1所述的修饰的DNA聚合酶，其中所述修饰的聚合酶选自以下之一：
a. T529M+S366A+A547F +Y242G/A/L/S
b. T529M+S366A+A547F+Y259G/K/Q
c. T529M+S366A+A547F+D128H
d. T529M+S366A+A547F+Y212G
e. T529M+S366A+A547F+ Y212K。
6.根据权利要求1所述的修饰的DNA聚合酶，其中所述修饰的聚合酶具有大于所述亲本聚合酶的延伸速率。
7.权利要求6的修饰的DNA聚合酶，其中所述延伸速率是所述亲本聚合酶的1.5至5倍。
8.权利要求6的修饰的DNA聚合酶，其中所述延伸速率是所述亲本聚合酶的至少1.5倍。
9.权利要求6的修饰的DNA聚合酶，其中所述延伸速率是所述亲本聚合酶的至少2倍。
10.权利要求6的修饰的DNA聚合酶，其中所述延伸速率是所述亲本聚合酶的至少3倍。
11.根据权利要求1所述的修饰的DNA聚合酶，其中所述修饰的聚合酶具有小于野生型或亲本聚合酶的中值等待时间。
12.根据权利要求11所述的修饰的DNA聚合酶，其中所述修饰的聚合酶具有小于根据SEQ ID NO:11的聚合酶的等待时间的中值等待时间。
13.根据权利要求11所述的修饰的DNA聚合酶，其中所述修饰的聚合酶具有小于3秒的中值等待时间。
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