[发明专利]用于定量生物试样中的胆汁酸的试剂盒及定量生物试样中的胆汁酸的方法

说明书

本发明的课题在于提供一种能够从高分子成分充分地解离胆汁酸而提高测定精度，并且能够在各种环境下迅速地进行高精度的胆汁酸的定量的用于定量胆汁酸的试剂盒以及定量胆汁酸的方法。根据本发明，提供一种试剂盒，其用于定量生物试样中的胆汁酸，所述试剂盒包含：干燥状态的由本说明书中所定义的通式(I)表示的化合物；荧光粒子，该荧光粒子包含与胆汁酸具有结合性的第一结合物质；及基板，该基板具有检测区域，所述检测区域包含与胆汁酸或上述第一结合物质中的任一者具有结合性的第二结合物质。

技术领域

本发明涉及一种用于定量生物试样中的胆汁酸的试剂盒及定量生物试样中的胆汁酸的方法。

背景技术

作为用于定量蛋白质、酶或无机化合物等的高灵敏度且容易的测定法，广泛地利用荧光检测法。荧光检测法为如下方法：检测对认为包含通过特定波长的光被激发而发出荧光的测定对象物质的试样照射上述特定波长的激发光时发出的荧光，由此确认测定对象物质的存在。在测定对象物质不是荧光体的情况下，使利用荧光色素标记与测定对象物质特异性结合的物质而得的物质与试样接触，之后以与上述相同的方式，检测照射激发光时发出的荧光，由此能够确认测定对象物质的存在。

在上述荧光检测法中，已知为了提高检测的灵敏度而利用由等离激元共振产生的电场增强的效果的方法。该方法中，为了产生等离激元共振，准备在透明的支撑体上的规定区域设置有金属膜的传感器芯片。然后，从支撑体中的与金属膜形成面相反的一面侧以全反射角度以上的角度对支撑体与金属膜的界面射入激发光。通过照射该激发光而在金属膜产生表面等离激元，通过由该表面等离激元的产生而引起的电场增强作用，荧光得到增强，从而信号/干扰比(S/N比)有所提高。利用表面等离激元激发的荧光检测法(表面等离激元荧光：Surface Plasmon Fluorescence，以下，称为“SPF法”)相较于利用落射激发的荧光检测法(以下，称为“落射荧光法”)，可获得约10倍的信号增强度，从而能够以高灵敏度进行测定。

血液中的低分子抗原(例如，甲状腺素(T4)及皮质醇等)很少单独存在，在大多数情况下以与血液中蛋白质(例如，白蛋白等)结合的状态存在。因此，在利用了抗原抗体反应的临床诊断中，需要从血液中蛋白解离低分子抗原，通常可使用水杨酸钠等来作为解离剂。

胆汁酸为在哺乳类的胆汁中广泛存在的类固醇衍生物中具有胆烷酸骨架的化合物的统称。关于该胆汁酸，也与其他低分子抗原同样地，在血液中通常与白蛋白等血液中蛋白质、牛磺酸结合，它们被称为结合胆汁酸(胆汁盐)。关于该胆汁酸，通常有10种，但是主要是胆酸、脱氧胆酸及鹅去氧胆酸这3种。将这些多种化合物的集合称为胆汁酸。胆汁酸的主要作用为在消化道内促进胶束的形成，并促进膳食脂肪的吸收。

关于狗及猫中的血清胆汁酸的定量，被认为是反映肝细胞功能及肠肝门静脉循环的检查。例如，在显示高肝酶活性但没有黄疸的狗、猫中，为了检测需要临床确诊的肝胆道系统疾病，示出血清胆汁酸的有用性。并且，在先天性门静脉循环分流的诊断中，为了提高诊断率，推荐空腹时及饭后的胆汁酸定量。胆汁酸浓度的值高时，怀疑急性肝炎、慢性肝病、胆汁淤积、肠内细菌过量繁殖、门静脉分流(portosystemicshunt；PSS)等，另一方面，胆汁酸浓度的值低时，怀疑肠吸收不良。如上所述，在狗及猫的诊断中，测定胆汁酸浓度来作为反映肝细胞功能及肠肝门静脉循环的指标，在非专利文献1中公开有简单的胆汁酸的测定方法。

另一方面，在血清及其他体液中的配体检验法中，希望减少或者完全去除干扰物质对所观测到的信号的影响。在专利文献1中记载有：作为用于使配体从其络合物解离的解离剂，使用水杨酸或8-苯胺基-1-萘磺酸。

以往技术文献

非专利文献

非专利文献1：Seibert et al.(2014)，PeerJ，DOI 10.7717/peerj.539

专利文献

专利文献1：日本特表2001-513877号公报