[发明专利]复合物的细胞内递送

说明书

本发明提供了用于将瞬时和/或可逆的复合物递送到细胞中的方法，该方法包括使细胞悬浮液通过缩窄部，其中所述缩窄部使该细胞变形，从而引起该细胞的扰动，这样使得该复合物进入该细胞。

相关申请的交叉引用

本申请要求于2016年1月12日提交的美国临时申请号62/277,858的优先权，将其通过引用以其全文特此结合。

技术领域

本公开文本总体上涉及通过使细胞悬浮液通过缩窄部以将复合物递送到细胞中的方法。

背景技术

细胞内递送是工程化有机体的研究和开发中的中心步骤。旨在对分子进行细胞内递送的现有技术依赖于电场、纳米粒子或成孔化学品。然而，这些方法遭遇许多并发症，包括非特异性分子递送、有效载荷分子的修饰或损坏、高细胞死亡、低通量和/或难以实施。由于它们的尺寸大，由诸如多肽、核酸、碳水化合物、脂质和/或小分子等生物分子构成的复合物不能容易地穿过细胞膜。因此，此类复合物的递送一直是一个挑战，并且对于在将复合物递送至多种细胞类型方面非常有效的细胞内递送技术存在未满足的需求。此外，允许快速、高通量细胞内递送复合物的技术可以更有效地应用于大规模临床、生产和药物筛选应用。描述使用通道将化合物递送至细胞的方法的参考文献包括WO 2013059343、WO2015023982、和PCT/US 2015/058489。

本文引用的所有参考文献，包括专利申请和出版物，均通过引用以其全文并入。

发明内容

本发明提供了用于将两种或更多种分子的复合物递送到细胞中的方法，该方法包括使细胞悬浮液通过缩窄部，其中所述缩窄部使细胞变形，从而引起细胞的扰动，这样使得分子的复合物进入细胞，其中所述细胞悬浮液与分子的复合物接触。在一些实施方案中，分子的复合物的形成是可逆的。在一些实施方案中，复合物的至少两种或更多种分子通过非共价相互作用缔合。在一些实施方案中，复合物中的至少两种分子在复合物中具有从约1μM至约1pM的结合亲和力。在一些实施方案中，复合物中的至少两种分子在复合物中具有从约1μM至约1nM或从约1nM至约1pM的结合亲和力。在一些实施方案中，复合物在细胞悬浮液中的半衰期为约1分钟至约48小时。在一些实施方案中，复合物在细胞悬浮液中的半衰期为约1分钟至约20分钟、约20分钟至约40分钟、约40分钟至约1小时、约1小时至约2小时、约2小时至约6小时、约6小时至约12小时、约12小时至约24小时、约24小时至约36小时、或约36小时至约48小时。

在一些实施方案中，复合物在洗涤剂的存在下解离。在一些实施方案中，复合物在洗涤剂的存在下以约0.1％(w/v)至约10％(w/v)的浓度解离。在一些实施方案中，复合物在洗涤剂的存在下以约0.1％(w/v)至约1％(w/v)、约1％(w/v)至约5％(w/v)、或约5％(w/v)至约10％(w/v)的浓度解离。

在一些实施方案中，在从约0℃至约40℃范围内的温度下使细胞悬浮液与分子的复合物接触。在一些实施方案中，分子的复合物在比细胞悬浮液与分子的复合物接触的温度高的温度下解离。在一些实施方案中，分子的复合物在约50℃至约70℃的温度下解离。在一些实施方案中，分子的复合物在约50℃至约60℃、或约60℃至约70℃的温度下解离。