[发明专利]针对TNF的CHO细胞糖基化嵌合抗体的改善的安全性和功效

说明书

公开了一种英夫利昔单抗样嵌合单克隆抗体，其具有至少80％的NANA糖基化末端唾液酸和Gal‑α(2,3/6)‑Gal的糖基化模式，该抗体与肿瘤坏死因子(TNF)α结合。所公开的英夫利昔单抗样单克隆抗体是与英夫利昔单抗具有相同的氨基酸序列(SEQ ID NO.1/SEQ ID NO.2的轻链/重链)的嵌合抗体，所述英夫利昔单抗具有至少80％的NGNA末端唾液酸和Gal‑α(1,3)‑Gal的糖基化模式。

技术领域

本公开提供英夫利昔单抗样嵌合单克隆抗体，其具有至少80％的NANA糖基化末端唾液酸和Gal-α(2,3/6)-Gal的糖基化模式。英夫利昔单抗样嵌合单克隆抗体结合至肿瘤坏死因子(TNF)α靶标。所公开的英夫利昔单抗样单克隆抗体是具有与英夫利昔单抗相同的氨基酸序列(SEQ ID NO.1/SEQ ID NO.2的轻链/重链)的嵌合抗体。然而，本发明的改进在于其具有至少80％的NGNA末端唾液酸的糖基化和Gal-α(1,3)-Gal的糖基化模式。

背景技术

糖基化是一种翻译后修饰。蛋白质分子表面糖链可对蛋白质分子的结构和功能产生影响。单克隆抗体的糖基化和聚糖结构与其功能相关，通过影响IgG分子与FcR、Clq和FeRn的结合来调节抗体依赖性细胞毒性(ADCC)、补体依赖性细胞毒性(CDC)和IgG分子的半衰期。糖基化还影响mAb(特别是非人类聚糖)的安全性特征，并且具有潜在的免疫原性。位于Fab功能区中的聚糖可影响这些药物的安全性和功效特征。

糖基化依赖于细胞表达系统和亚克隆选择、细胞培养因素，例如培养基组分和培养条件。此外，糖基化影响治疗性蛋白质的生物活性、功效、免疫原性和药代动力学。

CHO细胞和小鼠骨髓瘤细胞(NS0，SP2/0)表达系统已用于治疗性抗体和Fc-融合蛋白。目前，当前批准的治疗性单克隆抗体有48％在CHO细胞中表达，而45％在鼠细胞(21％NS0细胞、14％SP2/0细胞、10％杂交瘤细胞)中表达。

TNF引起导致组织损伤的促炎作用，例如诱导血管内皮细胞上的促凝血活性(Pober et al.,J.Immunol.136:1680(1986))、增加中性粒细胞和淋巴细胞的粘附(Poberet al.,J.Immunol.138:3319(1987))，并刺激巨噬细胞、中性粒细胞和血管内皮细胞释放血小板活化因子(Camussi et al.,J.Exp.Med.166:1390(1987))。

在大多数有超敏反应的患者的血清中发现了药物特异性IgE抗体，并且该药物特异性IgE抗体特异性地对α-Gal反应。英夫利昔单抗在哺乳动物细胞(小鼠骨髓瘤细胞SP2/0)中表达和制备。这个鼠细胞系含有另外的α1,3-半乳糖苷酶转移酶，该酶主要介导半乳糖残基从α构象的UDP-Gal转移至末端半乳糖残基，从而产生α-Gal。α-Gal是一种有害的非人类二糖，存在于mAb，尤其是在鼠细胞系中表达的mAb上的某些聚糖中。在用英夫利昔单抗治疗的一些患者中发现了高水平的抗α-Gal IgE抗体。此外，鼠细胞IgG糖基化与人细胞IgG糖基化的区别在于，鼠细胞不仅具有产生α-Gal表位的生物合成机制，而且还产生N-羟乙基神经氨酸酶(NGNA)，而不是N-乙酰苯酚神经氨酸酶(NANA)。NGNA中存在另外的氧原子。如果糖蛋白含有NGNA残基，则认为该糖蛋白与人类免疫原性密切相关。一些市售的治疗性糖蛋白因其含有NGNA残基而使患者引起严重的不良反应。因此，本领域需要通过降低英夫利昔单抗的免疫原性来提高英夫利昔单抗给药的安全性。本公开旨在提高药物安全性。

发明内容

本公开提供英夫利昔单抗样嵌合单克隆抗体，该抗体在N-糖基化位点具有至少80％的NANA糖基化末端唾液酸和Gal-α(2,3/6)-Gal的糖基化模式。所公开的英夫利昔单抗样单克隆抗体是具有与英夫利昔单抗相同的氨基酸序列(SEQ ID NO.1/SEQID NO.2的轻链/重链)的嵌合抗体，所述英夫利昔单抗具有至少80％的NGNA末端唾液酸和Gal-α(1,3)-Gal的糖基化模式。