[发明专利]荧光蛋白质

说明书

本发明提供pH稳定性高的(pH敏感性被降低的)黄绿色荧光蛋白质。在一种或多种实施方式中，荧光蛋白质具有在序列编号1的氨基酸序列的第2位至第225位的序列中至少导入有下述突变而成的氨基酸序列。在此，所述突变选自由F149T_orS_orA、L158T_orS_orA、H160T_orS_orA、Y174T_orS_orA、及、Y192T_orS_orA以及其2～5个的组合构成的组。

技术领域

本公开涉及pH稳定性高的黄绿色荧光蛋白质、其光开关突变体、它们的融合蛋白质、它们的分子传感器、DNA、表达盒、载体及转化体。

背景技术

荧光蛋白质被广泛用作可以实时追踪生物体内的分子行为的标志物，或作为用于检测离子浓度或者生理活性物质的荧光共振能量转移(FRET)型生物传感器的制作工具(例如，专利文献1)。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：日本特开2004-187544

发明内容

发明要解决的技术问题

但是，大部分荧光蛋白质在酸性环境下荧光强度大大降低，因此，难以用于溶酶体、分泌颗粒、白噬体等酸性环境。目前，报告有pH稳定性高的青色及红色荧光蛋白质，但未见相对于pH稳定的黄绿色荧光蛋白质的报告。

因此，本公开在一种方式中，提供pH稳定性高的(pH敏感性被降低的)黄绿色荧光蛋白质。

用于解决问题的技术方案

本公开在一种或多种实施方式中，涉及一种荧光蛋白质(下面，也称为本公开涉及的单体型荧光蛋白质)，其具有在序列编号1的氨基酸序列的第2位至第225位的序列中导入有至少下述突变而成的氨基酸序列。

在此，所述突变选自由F149T_orS_orA、L158T_orS_orA、H160T_orS_orA、Y174T_orS_orA、及、Y192T_orS_orA、以及其2～5个的组合构成的组。

本公开在其它一种或多种实施方式中，涉及一种荧光蛋白质(下面，也称为本公开涉及的二聚体型荧光蛋白质)，其具有序列编号1的氨基酸序列的第2位至第232位的序列、或者、具有在序列编号1的氨基酸序列的第2位至第232位的序列中缺失、取代和/或添加一个至多个氨基酸而成的氨基酸序列，pH敏感性(pKa)为4.0以下，且为二聚体型，荧光颜色为黄绿色。

本公开在其它一种或多种实施方式中，涉及向本公开涉及的单体型荧光蛋白质及本公开涉及的二聚体型荧光蛋白质中进一步导入有“形成光开关型的突变”而成的光开关突变型荧光蛋白质。

本公开在其它一种或多种实施方式中，涉及包含本公开涉及的荧光蛋白质的融合蛋白质或分子传感器。

本公开在其它一种或多种实施方式中，涉及包含对本公开涉及的荧光蛋白质、融合蛋白质或者分子传感器进行编码的碱基序列的核酸、或包含该碱基序列的表达盒、包含这些的载体或转化体。

发明效果

根据本公开，在一种方式中，可以提供pH稳定性高的(pH敏感性被降低的)黄绿色荧光蛋白质。利用该荧光蛋白质，在任意的一种或多种实施方式中，可以在酸性环境下成像，例如，可以在溶酶体、分泌颗粒、自噬体等酸性细胞环境下进行细胞成像。