[发明专利]T7 RNA聚合酶的热稳定变体在审

申请号：	201780016970.2	申请日：	2017-01-12
公开（公告）号：	CN108779446A	公开（公告）日：	2018-11-09
发明（设计）人：	J·翁;S·庄;H·浅原;K·C·洪;V·波塔波夫;G·采齐尼斯	申请（专利权）人：	新英格兰生物实验室公司
主分类号：	C12N9/12	分类号：	C12N9/12;C12N15/10
代理公司：	北京市君合律师事务所 11517	代理人：	吴瑜;孙倩
地址：	美国马***	国省代码：	美国;US
权利要求书：	查看更多	说明书：	查看更多
摘要：
搜索关键词：	变体噬菌体RNA聚合酶野生型热稳定性热稳定试剂盒申请
钻瓜网技术展会专利词库专利权人专利榜在售专利公布日期热门专利

【权利要求书】：

1.分离的RNA聚合酶变体，其中与SEQ ID NO：1相比，所述变体具有一个或多个氨基酸取代，其中所述一个或多个氨基酸取代是：T75Q、A83K、E108L、H205S、K206P、I281P、V297I、Y312D、A323I、A327P、K333P、V340E、A354Q、M362P、T375K、T375N、D388E、A428P、L446F、K454P、K461R、S495N、C510Q、L534V、V567P、D591E、G618Q、K642R、K711R、K740R、G788A、M832F、D834E、T835L、D847E、S856T、A863P、A866K、H205S/D388E、H205S/D388E/L534V、I109L/H205S/D388E/L534V、

I109L/H205S/D388E/L534V/V567P、或I109L/H205S/D388E/L534V/V567P/G618Q。

2.根据权利要求1所述的分离的RNA聚合酶变体，其中所述一个或多个氨基酸取代是：H205S、G618Q、H205S/D388E、H205S/D388E/L534V,I109L/H205S/D388E/L534V、I109L/H205S/D388E/L534V/V567P或I109L/H205S/D388E/L534V/V567P/G618Q。

3.融合蛋白，其包含与权利要求1-2中任一项所述的分离的RNA聚合酶变体连接的外源DNA结合结构域。

4.带标签的蛋白质，包含与纯化标签连接的根据权利要求1-2中任一项所述的分离的RNA聚合酶变体，其中所述纯化标签任选地是N-端六组氨酸。

5.根据权利要求1-2中任一项所述的分离的RNA聚合酶变体，其中，由于所述氨基酸取代，所述变体在高于45℃的温度下相对于SEQ ID NO：1所示的T7 RNA聚合酶具有增加的稳定性。

6.根据权利要求1-2中任一项所述的分离的RNA聚合酶变体，其中，由于所述一种或多种氨基酸取代，所述变体在高于42℃的温度下相对于SEQ ID NO：1所示的T7 RNA聚合酶具有增加的活性。

7.根据权利要求1-2中任一项所述的分离的RNA聚合酶变体，

其包含SEQ ID NO：52-70中的任一个的氨基酸序列。

8.根据权利要求1-2中任一项所述的分离的RNA聚合酶变体，其包含与SEQ ID NO：70相同的氨基酸序列。

9.一种组合物，其包括：

(i)根据权利要求1-2、5-8中任一项所述的分离的RNA聚合酶变体，或权利要求3所述的融合蛋白，或权利要求4所述的带标签的蛋白质；和

(ii)缓冲剂。

10.根据权利要求9所述的组合物，其还包含核糖核苷三磷酸和/或修饰的核苷酸。

11.根据权利要求9或10所述的组合物，其还包含模板DNA分子，所述模板DNA分子包含：启动子，其与待转录的靶核苷酸序列可操作地连接。