[发明专利]利用甜菊苷从葡萄藤的组织的细胞培养中大量生产葡萄素的方法

说明书

本发明涉及利用甜菊苷从葡萄藤的组织的细胞培养中大量生产葡萄素的方法，在本发明的葡萄素的情况下，众所周知，上述葡萄素对肝脏保护、抗癌、抗氧化及皮肤的美白起到作用，而且对低密度脂蛋白和高密度脂蛋白的氧化以及血管平滑肌细胞的增殖和迁移具有阻碍作用。因此，本发明有效用于从来自葡萄植物的花药组织的愈伤组织中大量生产有用物质(二苯乙烯化合物)，尤其是葡萄素的方法，这对相关产业非常重要。

技术领域

本发明涉及利用甜菊苷从葡萄藤的组织的细胞培养中大量生产葡萄素的方法。

背景技术

主要以白藜芦醇化合物来显示的二苯乙烯是来自由苯基丙氨酸开始的普通苯丙烷途径的一小类植物的次级代谢产物。白藜芦醇(resveratrol；3，4'，5-transtrihydroxystilbene)是如葡萄、花生及莓类等的一部分植物在应对如紫外线照射或真菌感染等的环境压力时产生的一种自然产生的植物抗毒素(phytoalexin)。白藜芦醇及其衍生物不仅在植物防御反应中作为植物抗毒素及抗氧化物质起到重要作用，而且具有多种有益特性，如抗癌效果、抗炎效果、抗肿瘤活性及抗衰老效果等。

然而，像这样，具有如抗癌、抗氧化活性等的效果的白藜芦醇是已被确定其潜力的有前途的天然功能性资源，今后可通过多种研究用作功能性食品原料及新药原料来所使用，但是，目前将韩国国内的葡萄品种作为对象，用于增加该物质的含量的培养生理学及生物技术方面的研究极少。在这方面，作为增加白藜芦醇的含量的方法，最近揭示了在已收获的葡萄上人工接种霜霉病(Plasmopara viticola)菌株的方法(韩国公开专利第2003-21976号)、在已收获的葡萄上进行短波紫外线处理的方法(J.Argic Food Chem.2002Oct23；50(22)：6322-9；W00200192)或用铝处理葡萄的方法(US6834398)等，但这些都是收获葡萄后的处理方法或者栽培葡萄时的简单处理方法。

在韩国公开专利第2005-0089492号中公开了“使用环境因子生产高含量白藜芦醇的葡萄的方法”，在韩国公开专利第2003-0021976号中公开了“使来自葡萄的天然抗癌物质的白藜芦醇的含量得到增大的白藜芦醇强化葡萄及其生产方法”，但如本发明所述，目前还没有公开“利用甜菊苷从葡萄藤的组织的细胞培养中大量生产葡萄素的方法”。

发明内容

技术问题

本发明是根据如上所述的要求而提出的，本发明人为了构筑从来自葡萄植物的花药组织的愈伤组织中大量生产有用物质(二苯乙烯化合物)，将葡萄藤的花药组织切片移植到添加有植物生长调节物质的MS固体培养基中之后进行培养并对愈伤组织进行诱导，并且在增殖培养基中对经过诱导的上述愈伤组织进行培养来使之增殖后，在包含茉莉酮酸甲酯作为活性诱导剂、包含甜菊苷作为助溶剂的液体培养基中对经过增殖的上述愈伤组织进行振荡培养，结果确认出：在烧瓶条件下没有产生白藜芦醇，仅产生了δ-葡萄素(δ-viniferin)(图3)，在满足扩大(scale-up)条件的生物反应器的条件下确认出：不仅对δ-葡萄素有效果而且对昂贵的ε-葡萄素的生产非常有效(图5)。

并且，在经过增殖的上述愈伤组织培养的培养基中处理活性诱导剂及助溶剂(甜菊苷)之后，在烧瓶条件下进行静置培养之后，结果确认出：仅生产白藜芦醇而不生产葡萄素(图6A)，在进行振荡培养之后确认出：仅生产葡萄素而不生产白藜芦醇(图6B)。

通过本发明确认出：可以大量生产二苯乙烯，尤其，通过本发明的将甜菊苷用作助溶剂使用的来自葡萄藤的组织的愈伤组织的培养方法，不仅对δ-葡萄素的生产有效而且对昂贵的ε-葡萄素的生产非常有效，从而完成了本发明。

解决问题的手段

为了解决上述技术问题，本发明提供从葡萄藤中大量生产葡萄素的方法，包括：步骤(a)，将葡萄藤的组织切片移植到愈伤组织诱导培养基中来对葡萄藤的愈伤组织进行诱导；步骤(b)，在增殖培养基中对经过诱导的上述葡萄藤的愈伤组织进行培养来使之增殖；以及步骤(c)，在经过增殖的上述愈伤组织中添加活性诱导剂及助溶剂来进行振荡培养。