[发明专利]蛋白质的制造方法

说明书

本发明公开了在丝状菌培养中即使进行培养的放大也能够抑制培养中的溶解氧饱和度降低的、采用丝状菌制造蛋白质的方法。蛋白质的制造方法包含下述步骤：将包含纤维素和木聚糖的生物质作为诱导剂对破坏了BXL1基因的木霉属真菌进行培养。如果使用破坏了BXL1基因的木霉属真菌，则即使使用木糖和纤维素作为诱导剂，也能够抑制溶解氧饱和度降低。

技术领域

本发明涉及采用木霉属真菌制造蛋白质的方法。

背景技术

丝状菌由于其蛋白质分泌能力高，因此非常适于蛋白质的生产。因此，迄今为止使用了丝状菌的蛋白生产方法大量施行。然而，丝状菌为需氧微生物，因此在将丝状菌进行液体培养时，需要在培养基中供给氧，培养中将培养基中的溶解氧饱和度保持为一定以上。丝状菌具有菌丝，因此具有随着培养进行，培养基的粘度提高这样的特征。如果粘度提高，则氧、营养素的分布变得不均匀，丝状菌的生长、蛋白质的生产性降低，因此为了对丝状菌进行培养而使蛋白质有效率地生产，需要搅拌培养液，或使氧供给量增加。

此外，如果培养槽大型化，则氧传递容量系数变低，因此为了将培养中的溶解氧饱和度保持为一定以上，需要增加搅拌数、氧供给量。然而，如果增加搅拌数，则存在对菌体施加大的剪切破坏这样的课题，为了增加氧供给量，存在需要更大的能量的课题。

作为使培养液的粘度降低的方法，专利文献1中公开了在培养基中添加菌丝伸长抑制物质而使菌丝形态为颗粒状的方法，专利文献2中公开了抑制了成为粘度原因物质的蛋白质的分泌的丝状菌的突变株。

另一方面，已知为了使用丝状菌而使蛋白质的生产量增加，添加诱导蛋白质的生产的诱导剂的方法，例如，专利文献3中公开了，为了使作为蛋白质的纤维素酶的生产性提高，在培养基中添加纤维素、根据情况添加木聚糖等作为诱导剂的方法。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：日本特开平7-31467

专利文献2：WO2012027580

专利文献3：日本特开2014-150745

发明内容

发明所要解决的课题

如上所述，丝状菌培养的放大(scale up)的主要课题是伴随放大的搅拌能量的增大、和对培养液的氧供给量。此外，如实施例中后述那样，新发现在对作为丝状菌的木霉属真菌进行培养时，如果添加纤维素和木聚糖作为诱导剂，则存在与单独添加纤维素或木聚糖的培养相比，氧利用速度变高这样的课题。如果氧利用速度变高，则培养中的溶解氧饱和度进一步降低。

用于解决课题的方法

本发明人等进行了深入研究，结果发现，即使使用纤维素和木聚糖作为诱导剂，如果使用木霉属真菌的编码β-木糖苷酶的BXL1基因被破坏了的木霉属，则木霉属真菌的氧利用速度降低，培养中的溶解氧饱和度降低被抑制，从而完成了本发明。

即，本发明提供以下(1)～(16)。

(1)一种采用木霉属真菌制造蛋白质的方法，其包含下述步骤：以包含纤维素和木聚糖的生物质作为诱导剂对破坏了BXL1基因的木霉属真菌进行培养。

(2)根据(1)所述的方法，将上述诱导剂以5重量％(wt/wt)以上的量添加到培养基进行培养。

(3)根据(1)或(2)所述的方法，上述诱导剂所包含的木聚糖的含量为 15～40重量％。

(4)根据(1)～(3)中任一项所述的方法，上述木霉属真菌为里氏木霉。

(5)根据(4)所述的方法，上述里氏木霉为解除了碳分解代谢物阻遏的株。

(6)根据(1)～(5)中任一项所述的方法，上述蛋白质为纤维素酶组合物。