[发明专利]增加双链RNA产生的方法和组合物

权利要求书

1.一种在微生物细胞中产生未衣壳化的dsRNA的方法，所述微生物细胞包含：(1)编码衣壳蛋白的外壳蛋白基因，其中所述衣壳蛋白是噬菌体MS2的衣壳蛋白、噬菌体Qβ的衣壳蛋白或其N端片段；和(2)编码异源dsRNA的基因，所述异源dsRNA包含由非互补序列分开的自身互补序列段，使得在互补序列杂交时形成茎-环结构，所述茎结构具有超过MS2衣壳的内径的长度，所述方法包括共表达所述dsRNA与所述外壳蛋白基因，其中产生的未衣壳化的dsRNA的量显著高于当未共表达所述外壳蛋白基因时产生的未衣壳化的dsRNA的量。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述衣壳蛋白由噬菌体MS2的所述外壳蛋白基因编码。

3.根据权利要求1所述的方法，其中所述衣壳蛋白由噬菌体Qβ的所述外壳蛋白基因编码。

4.根据权利要求1所述的方法，其中编码所述dsRNA的所述基因和编码所述衣壳蛋白的所述外壳蛋白基因由诱导型启动子表达。

5.根据权利要求4所述的方法，其中编码所述衣壳蛋白的所述外壳蛋白基因由组成型启动子表达并且编码所述dsRNA的所述基因由诱导型启动子表达。

6.根据权利要求1所述的方法，其中编码所述衣壳蛋白的所述外壳蛋白基因在编码所述dsRNA的所述基因之前或同时表达。

7.根据权利要求1所述的方法，其中编码所述dsRNA的所述基因和编码所述衣壳蛋白的所述外壳蛋白基因存在于所述微生物细胞内的一个质粒或染色体外元件上。

8.根据权利要求1所述的方法，其中编码所述dsRNA的所述基因和编码所述衣壳蛋白的所述外壳蛋白基因存在于所述微生物细胞内的单独的质粒或染色体外元件上。

9.根据权利要求1所述的方法，其中编码所述dsRNA和所述衣壳蛋白的所述基因中的一个存在于质粒或染色体外元件上并且编码所述dsRNA和所述衣壳蛋白的所述基因中的另一个存在于所述微生物细胞的染色体上。

10.根据权利要求1所述的方法，其中编码所述dsRNA的所述基因和编码所述衣壳蛋白的所述外壳蛋白基因存在于所述微生物细胞的染色体上。

11.根据权利要求1所述的方法，其中所述dsRNA是RNAi前体。

12.根据权利要求1所述的方法，包括从微生物细胞的裂解物回收未衣壳化的dsRNA的步骤。

13.根据权利要求1所述的方法，其中产生所述dsRNA后，所述微生物细胞被裂解并且处理以用于应用而不进一步纯化所述dsRNA。

14.根据权利要求1所述的方法，其中产生所述dsRNA后所述微生物细胞被处理以用于应用而不裂解或进一步纯化所述dsRNA。

15.根据权利要求1所述的方法，其中所述衣壳蛋白是MS2或Qβ的氨基端片段，其包含所述衣壳蛋白的至少前11个氨基酸并且不超过前41个氨基酸，优选地其中所述氨基端片段包含所述衣壳蛋白的前41个氨基酸、前35个氨基酸、前25个氨基酸、前21个氨基酸或前12个氨基酸。

16.根据权利要求15所述的方法，其中所述氨基端片段包含所述衣壳蛋白的前41个氨基酸。

17.根据权利要求15所述的方法，其中所述氨基端片段包含所述衣壳蛋白的前35个氨基酸。

18.根据权利要求15所述的方法，其中所述氨基端片段包含所述衣壳蛋白的前25个氨基酸。