[发明专利]Mini-III RNA酶、改变Mini-III RNA酶切割RNA序列的特异性的方法及其用途

权利要求书

1. 一种具有氨基酸序列的Mini-III RNA酶，所述氨基酸序列包含受体部分和在Mini-III RNA酶结构中分别形成α4螺旋和α5b-α6环结构的可移植的α4螺旋和可移植的α5b-α6环，

其中分别形成α4螺旋和α5b-α6环结构的片段在结构上对应于分别由SEQ ID NO：1中所示的来自枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)的Mini-III RNA酶的氨基酸序列片段46-52和85-98形成的α4螺旋和α5b-α6环的相应结构，

其中所述Mini-III RNA酶在dsRNA切割中显示出序列特异性，所述dsRNA切割仅依赖于底物的核糖核苷酸序列，并且不依赖于底物结构中二级结构的出现，并且不依赖于其它辅助蛋白的存在，

并且其中所述Mini-III RNA酶不是SEQ ID NO: 1的来自枯草芽孢杆菌的Mini-III蛋白，也不是具有D94R突变的SEQ ID NO: 1。

2. 根据权利要求1所述的Mini-III RNA酶，其特征在于氨基酸序列由源自一种微生物的Mini-III RNA酶的受体部分与分别源自来自不同微生物的Mini-III RNA酶的α4螺旋和/或α5b-α6环序列的插入的可移植的α4螺旋和/或可移植的α5b-α6环构成。

3. 根据权利要求1或2所述的Mini-III RNA酶，其特征在于其氨基酸序列包含

- 源自BsMiniIII^wt(SEQ ID NO: 1)、或Caldicellulosiruptor kristjanssonii的Mini-III CkMiniIII^wt (SEQ ID NO: 2)、或多枝梭菌(Clostridium ramosum)的CrMiniIII^wt (SEQ ID NO: 4)、或热纤维梭菌(Clostridium thermocellum)的CtMiniIII^wt(SEQ ID NO: 6)、或Faecalibacterium prausnitzii的FpMiniIII^wt(SEQ ID NO: 8)、或具核梭杆菌具核亚种(Fusobacterium nucleatum subsp. Nucleatum)的FnMiniIII^wt(SEQ IDNO: 10)、或表皮葡萄球菌(Staphylococcus epidermidis)的SeMiniIII^wt(SEQ ID NO:12)、或海栖热袍菌(Thermotoga maritima)的TmMiniIII^wt(SEQ ID NO: 14)、或现称为Caldanaerobacter subterraneus subsp. Tengcongensis的腾冲热厌氧杆菌(Thermoanaerobacter tengcongensis)的TtMiniIII^wt (SEQ ID NO: 16)的Mini-III RNA酶的受体部分，或与其具有至少80％、优选85％、更优选90％、最优选95％同一性的氨基酸序列；

- 可移植的α4螺旋，其源自

具有包括SEQ ID NO: 1的46-52位氨基酸的氨基酸序列的BsMiniIII^wt、或具有包括SEQID NO: 2的氨基酸36-42的氨基酸序列的CkMiniIII^wt、或具有包括SEQ ID NO: 4的氨基酸40-46的氨基酸序列的CtMiniIII^wt、或具有包括SEQ ID NO: 6的56-62位氨基酸的氨基酸序列的CtMiniIII^wt、或具有包括SEQ ID NO: 8的45-51位氨基酸的氨基酸序列的FpMiniIII^wt、或具有包括SEQ ID NO: 10的氨基酸45-51的氨基酸序列的FnMiniIII^wt、或具有包括SEQ ID NO: 12的43-49位氨基酸的氨基酸序列的SeMiniIII^wt、或具有包括SEQ IDNO: 14的氨基酸45-51的氨基酸序列的TmMiniIII^wt、或具有包括SEQ ID NO: 16的氨基酸50-56的氨基酸序列的TtMiniIII^wt，或与其具有至少80％、优选85％、更优选90％、最优选95％同一性的氨基酸序列，和/或

- 可移植的α5b-α6环，其源自

具有包括SEQ ID NO: 1的85-98位氨基酸的氨基酸序列的BsMiniIII^wt、或具有包括SEQID NO: 2的氨基酸73-86的氨基酸序列的CkMiniIII^wt、或具有包括SEQ ID NO: 4的氨基酸79-88的氨基酸序列的CtMiniIII^wt、或具有包括SEQ ID NO: 6的93-106位氨基酸的氨基酸序列的CtMiniIII^wt、或具有包括SEQ ID NO: 8的82-95位氨基酸的氨基酸序列的FpMiniIII^wt、或具有包括SEQ ID NO: 10的氨基酸82-95的氨基酸序列的FnMiniIII^wt、或具有包括SEQ ID NO: 12的82-95位氨基酸的氨基酸序列的SeMiniIII^wt、或具有包括SEQ IDNO: 14的氨基酸82-93的氨基酸序列的TmMiniIII^wt、或具有包括SEQ ID NO: 16的氨基酸87-100的氨基酸序列的TtMiniIII^wt，或与其具有至少80％、优选85％、更优选90％、最优选95％同一性的氨基酸序列。