[发明专利]优化的因子VIII基因

权利要求书

1.一种分离的核酸分子，其核苷酸序列编码具有FVIII活性的多肽且如SEQ ID NO:71的核苷酸58-2277和2320-4374或SEQ ID NO:71的核苷酸58-4374所示。

2.如权利要求1所述的分离的核酸分子，其中所述核苷酸序列连接至编码信号肽的核酸序列，其中所述编码信号肽的核酸序列包含：

(i)SEQ ID NO:1的核苷酸1至57；

(ii)SEQ ID NO:2的核苷酸1至57；

(iii)SEQ ID NO:3的核苷酸1至57；

(iv)SEQ ID NO:4的核苷酸1至57；

(v)SEQ ID NO:5的核苷酸1至57；

(vi)SEQ ID NO:6的核苷酸1至57；

(vii)SEQ ID NO:70的核苷酸1至57；

(viii)SEQ ID NO:71的核苷酸1至57；或

(ix)SEQ ID NO:68的核苷酸1至57。

3.如权利要求1或2所述的分离的核酸分子，其中所述核苷酸序列连接至编码异源氨基酸序列的异源核苷酸序列，其中所述异源氨基酸序列是免疫球蛋白恒定区或其一部分、XTEN、转铁蛋白、白蛋白或PAS序列。

4.如权利要求3所述的分离的核酸分子，其中所述异源氨基酸序列连接至由所述核苷酸序列编码的氨基酸序列的N端或C端或插入由所述核苷酸序列编码的氨基酸序列中的在选自如SEQ ID NO:15所示的成熟人FVIII的位置3,18,22,26,40,60,65,81,116,119,130,188,211,216,220,224,230,333,336,339,375,378,399,403,409,416,442,487,490,494,500,518,588,603,713,745,1656,1711,1720,1725,1749,1796,1802,1827,1861,1896,1900,1904,1905,1910,1937,2019,2068,2111,2120,2171,2188,2227和2332的一个或多个插入位点处的两个氨基酸之间。

5.一种分离的核酸分子，其核苷酸序列编码具有FVIII活性的FVIII多肽且如SEQ IDNO:72所示。

6.一种载体，其包含如权利要求1至5中任一项所述的核酸分子。

7.如权利要求6所述的载体，其中所述载体是慢病毒载体。

8.一种宿主细胞，其包含如权利要求1至5中任一项所述的核酸分子或如权利要求6或7所述的载体。

9.一种产生具有FVIII活性的多肽的方法，所述方法包括：在一定条件下培养如权利要求8所述的宿主细胞，由此产生具有FVIII活性的多肽；和回收所述具有FVIII活性的多肽。

10.如权利要求1至5中任一项所述的核酸分子或如权利要求6或7所述的载体用于制备治疗出血病症的药物的用途。