[发明专利]扩展临床组织样本的方法

权利要求书

1.一种用于制备可扩展生物样本的方法，包括以下步骤

(a)使所述样品与将与所述样品内的生物分子结合的大分子接触；

(b)用双官能交联剂处理所述样本；

(c)用可溶胀聚合物的前体渗透所述样本；

(d)聚合所述前体以在所述样本内形成可溶胀聚合物；

(e)将所述生物分子锚定到所述可溶胀聚合物上；以及

(f)将所述样品与约1至约100U/ml的非特异性蛋白酶在具有约4至约12之间的pH的缓冲液中，在约50℃至约70℃下温育约0.5至约3小时，所述缓冲液包括约5mM至约100mM的金属离子螯合剂，约0.1％至约1.0％的非离子表面活性剂，和约0.05M至约1.0M的单价盐。

2.根据权利要求1所述的方法，其中，通过使所述可溶胀聚合物与溶剂或液体接触以引起所述可溶胀聚合物溶胀而扩展所述可扩展样本。

3.根据权利要求1所述的方法，其中，所述样本是先前保藏的临床样品。

4.根据权利要求3所述的方法，其中，所述样品是福尔马林固定石蜡包埋的(FFPE)或苏木精和伊红(H&E)染色的组织样品，或新鲜冷冻的样品，并且其中，在接触步骤(a)之前，所述方法还包括以下步骤

(i)如果所述样品是封固的，将所述样品去盖玻片；

(ii)如果所述样品是封固的，对所述样品进行封固介质去除；

(iii)如果执行了步骤(ii)，对所述样品进行再水化；以及

(iv)对所述样品进行抗原修复。

5.根据权利要求1所述的方法，其中，所述蛋白酶选自蛋白酶K，枯草杆菌蛋白酶，胃蛋白酶，嗜热菌蛋白酶和弹性蛋白酶。

6.根据权利要求1所述的方法，其中，所述缓冲液选自三羟甲基氨基甲烷，柠檬酸盐，磷酸盐，碳酸氢盐，MOPS，硼酸盐，TAPS，N,N-双(2-羟乙基)甘氨酸，三(羟甲基)甲基甘氨酸，HEPES，TES和MES。

7.根据权利要求1所述的方法，其中，所述螯合剂选自EDTA，EGTA，EDDHA，EDDS，BAPTA和DOTA。

8.根据权利要求1所述的方法，其中，所述表面活性剂选自曲拉通X-100，吐温20，吐温80，脱水山梨糖醇，聚山梨醇酯20，聚山梨醇酯80，

PEG，癸基葡糖苷，癸基多聚葡萄糖和椰油酰胺DEA。

9.根据权利要求1所述的方法，其中，所述盐选自Na⁺，K⁺，铵和Cs⁺。

10.根据权利要求1所述的方法，其中，将所述样品在包括8U/ml蛋白酶K，50mM三羟甲基氨基甲烷，25mM EDTA，0.25％曲拉通X-100和0.4M NaCl的缓冲液中温育。

11.根据权利要求1所述的方法，其中，所述双官能交联剂是6-((丙烯酰基)氨基)己酸(AcX)的琥珀酰亚胺酯。

12.根据权利要求1所述的方法，其中，在所述接触步骤(a)之前，对所述样品进行抗原修复。

13.根据权利要求12所述的方法，其中，所述样品在约100℃下在20mM柠檬酸钠溶液中加热。